Różnica między PCR a PCR w czasie rzeczywistym

PCR vs PCR w czasie rzeczywistym

PCR lub reakcja łańcuchowa polimerazy to zrewolucjonizowane odkrycie we współczesnej biologii molekularnej, które po raz pierwszy opracował chemik Kary Mullis w 1983 roku. Umożliwia amplifikację pojedynczej sekwencji w złożonym DNA do analizy. Podstawową ideą PCR jest to, że dwa startery, które są komplementarne do przeciwnych nici sekwencji DNA, są zorientowane względem siebie; startery wytwarzają komplementarne nici, z których każda zawiera drugi starter. Zatem wynikiem jest duża ilość sekwencji odpowiadającej DNA, która leży między dwoma starterami. Enzym polimerazy DNA służy do przedłużenia starterów w PCR. Polimeraza DNA jest enzymem termostabilnym i ma zdolność przetrwania w wysokich temperaturach (94 do 95 ° C) wykorzystywanych do denaturacji matrycy DNA.

PCR obejmuje trzy etapy, mianowicie powtarzane rundy denaturacji, hybrydyzacji starterów i syntezy DNA. Do przeprowadzenia tej reakcji stosuje się urządzenie termocyklera, dzięki czemu można je zaprogramować w celu szybkiego i dokładnego zmieniania temperatur. Zastosowania PCR obejmują dochodzenia kryminalne, odcisk palca DNA, wykrywanie patogenów i analizę DNA wczesnych gatunków ludzkich.

Co to jest konwencjonalna PCR?

Istnieją trzy główne etapy konwencjonalnej PCR, a mianowicie; Etap amplifikacji DNA, rozdział PCR i wykrywanie produktów. Rozdzielanie segmentów DNA zwykle przeprowadza się za pomocą elektroforezy w żelu agarozowym. Produkty są następnie barwione bromkiem etheiduimu. Wreszcie, wykrywanie osiąga się przez wizualizację pasm na żelach w świetle UV. Dlatego końcowe wyniki konwencjonalnej PCR nie są wyrażone w liczbach. Zwykle konwencjonalna PCR jest w stanie wykryć tylko jeden parametr.

Co to jest PCR w czasie rzeczywistym?

PCR w czasie rzeczywistym może wykryć amplifikację produktów, ponieważ produkty są syntetyzowane. Wraz z rozwojem technologii PCR stało się bardzo popularną techniką, szczególnie do wykrywania i identyfikacji bakterii w żywności. PCR w czasie rzeczywistym wykorzystuje system barwników fluorescencyjnych i termocykler wyposażony w funkcję wykrywania fluorescencji.

Jaka jest różnica między konwencjonalną PCR a PCR w czasie rzeczywistym?

• Konwencjonalna PCR jest bardziej czasochłonna, ponieważ wykorzystuje elektroforezę żelową do analizy zamplifikowanych produktów PCR. Natomiast PCR w czasie rzeczywistym zajmuje mniej czasu, ponieważ może wykryć amplifikacje we wczesnych fazach reakcji.

• PCR w czasie rzeczywistym zbiera dane w wykładniczej fazie wzrostu PCR, podczas gdy tradycyjna PCR zbiera dane w punkcie końcowym reakcji.

• Wyniki punktu końcowego konwencjonalnej PCR mogą nie być bardzo dokładne, ale wyniki PCR w czasie rzeczywistym są bardzo dokładne.

• PCR w czasie rzeczywistym jest bardziej czuły niż konwencjonalna PCR.

• Konwencjonalna PCR ma bardzo niską rozdzielczość, podczas gdy PCR w czasie rzeczywistym może wykryć bardzo małe zmiany ze względu na wysoką rozdzielczość.

• Wykrywanie punktu końcowego konwencjonalnego PCR ma krótki zakres dynamiczny, podczas gdy wykrywanie PCR w czasie rzeczywistym ma szeroki zakres dynamiczny.

• W przeciwieństwie do konwencjonalnej PCR, techniki automatycznego wykrywania znajdują się w PCR w czasie rzeczywistym.

• Konwencjonalna PCR jest wysoce zaawansowana i pracochłonna bardziej niż PCR w czasie rzeczywistym.

• W przeciwieństwie do PCR w czasie rzeczywistym, konwencjonalna PCR nie rozróżnia martwych i żywych bakterii.

• PCR w czasie rzeczywistym wykorzystuje system barwników fluorescencyjnych do wykrywania produktów, podczas gdy konwencjonalna PCR wykorzystuje bromek etydyny i światło UV do wizualizacji pasm w podłożu z żelem agarozowym.