Różnica między RT-PCR a QPCR

Reakcja łańcuchowa polimerazy z odwrotną transkrypcją (RT-PCR)

RT-PCR vs. QPCR

Postępy w biotechnologii doprowadziły do ​​odkrycia kilku sposobów radzenia sobie z zapotrzebowaniem na przeszczepy narządów na przestrzeni lat. Wcześniej osoba, która dobrowolnie oddałaby jakikolwiek organ bezpośrednio po śmierci potrzebującemu pacjentowi, mogła jedynie rozpocząć operację transplantacji. Ciągłe badania i badania biologów prowadzą do odkrycia komórek macierzystych.

Komórki macierzyste odnoszą się do tych, które są pobierane z DNA zarodka, który posłuży jako źródło do regeneracji komórek, które w zasadzie byłyby klonem narządu, na którym odzyskano DNA. Podczas gdy działacze praw człowieka lobbują za zatrzymaniem takich procedur, udane operacje rzeczywiście udowodniły skuteczność rozwoju komórek macierzystych w przeszczepach narządów.

Zanim jednak docenimy i w pełni zrozumiemy komórki macierzyste, trzeba zapoznać się z różnymi terminologiami związanymi z tym odkryciem naukowym. Hodowanie komórek macierzystych dotyczy DNA i jego kodowania. Dlatego ważne jest, aby studenci lub osoby zainteresowane tą dziedziną rozróżniały RT-PCR i qPCR.

Reakcja łańcuchowa polimerazy z odwrotną transkrypcją (RT-PCR) jest jednym z wielu wariantów reakcji łańcuchowej polimerazy lub PCR. Ta technika laboratoryjna jest szeroko stosowana w biologii molekularnej, aby naukowcy mogli wytworzyć wiele kopii określonej sekwencji DNA w procesie zwanym „amplifikacją”. Różnica między RT-PCR a tradycyjną PCR polega na tym, że RNA jest najpierw transkrybowany w odwrotnym kierunku do swojego dopełniacza DNA, który wykorzystuje odwrotną transkryptazę. Nowy komplementarny DNA zawierający odwróconą transkrypcję zostanie następnie amplifikowany przy użyciu tradycyjnej PCR lub PCR w czasie rzeczywistym.

Większość studentów badających ten proces często popełnia błąd wymiany PCR z odwrotną transkrypcją i PCR w czasie rzeczywistym, ponieważ oba są skracane podobnie. Aby uniknąć zamieszania, biolodzy określają PCR w czasie rzeczywistym jako ilościową PCR w czasie rzeczywistym lub qPCR.

QPCR różni się znacznie od RT-PCR, ponieważ qPCR jest odpowiedzialny za pomiar amplifikacji w jej przebiegu. Można powiedzieć, że RT-PCR rozpoczyna proces amplifikacji, podczas gdy qPCR mierzy go w trakcie trwania procedury.

Ilościowa PCR w czasie rzeczywistym

QPCR zrewolucjonizował tradycyjną metodę jednokierunkową, jeśli chodzi o oznaczanie ilościowe DNA i RNA, ponieważ zastosowanie metody qPCR umożliwia biologom określenie początkowego stężenia kwasu nukleinowego jeszcze przed zaobserwowaniem wyników reakcji i zanotowałem.

Zastosowanie qPCR, które jest obecnie uważane za najpotężniejszą i najbardziej czułą technikę analizy do badań genetycznych, znacznie się poszerzyło. Obecnie zajmuje się ilościową analizą ekspresji genów, genotypowaniem, wykrywaniem patogenów i analizą SNP, a także pomiarami interferencji RNA.

QPCR jest często łączony z procesem odwrotnej transkrypcji w celu oceny ilościowej informacyjnego RNA i MicroRNA obecnego w komórkach tkanek obserwowanych i eksperymentowanych. To daje kolejną widoczną różnicę między nimi: RT-PCR może być użyty do procesu amplifikacji, ale musi być połączony z qPCR do celów kwantyfikacji.

Wiadomo również, że QPCR jest bardziej ilościowy, ponieważ dane można gromadzić w miarę postępu wykładniczej fazy wzrostu (log) PCR. Biolodzy zauważają, że ilość produktu ubocznego PCR jest wprost proporcjonalna do ilości matrycowego kwasu nukleinowego, który zostanie zmierzony za pomocą qPCR.

Z drugiej strony RT-PCR jest daleki od natury ilościowej, ponieważ przestrzeganie intensywności amplifikowanego prążka na żelu zgodnie z ustalonym standardem stężenia może prowadzić do wnioskowania „półilościowego”.

Streszczenie:

1.QPCR i RT-PCR są terminami stosowanymi w biotechnologii i stosowanymi do produkcji wielu kopii DNA.
2. RT-PCR służy do amplifikacji odwróconej transkrypcji kodu DNA; QPCR mierzy wzmocnienie.
3. RT-PCR służy do amplifikacji, podczas gdy qPCR służy do kwantyfikacji.
4.QPCR ma charakter ilościowy, podczas gdy RT-PCR nie.