Różnica między żelem układającym a żelem rozdzielającym
Share
Kluczowa różnica - układanie żelu w stos i rozdzielanie Żel
Pojęcia żel do układania w stos i żel rozdzielający są stosowane w celu wyjaśnienia techniki SDS-PAGE. Elektroforeza w żelu SDS-PAGE lub żelu dodecylosiarczanowym-poliakryloamidowym jest techniką laboratoryjną stosowaną do oddzielania cząsteczek białka na podstawie ich masy cząsteczkowej. Teoria leżąca u podstaw tej techniki polega na tym, że białka o różnych masach cząsteczkowych wykazują różne prędkości migracji; cząsteczki o niskiej masie cząsteczkowej migrują szybciej, natomiast cząsteczki o wysokiej masie cząsteczkowej migrują powoli. Pożywką do migracji jest żel. Istnieją dwa rodzaje żeli o nazwie żel do układania w stos i żel rozdzielający. The kluczowa różnica między układaniem żelu w stos a żelem rozdzielającym jest to pH żelu do układania w stos wynosi 6,8, podczas gdy pH żelu rozdzielającego wynosi 8,8.
ZAWARTOŚĆ
1. Przegląd i kluczowa różnica
2. Co to jest Stacking Gel
3. Co to jest żel rozdzielający
4. Związek między żelem układającym a żelem rozdzielającym
5. Porównanie obok siebie - żel do układania w stos vs żel rozdzielający w formie tabelarycznej
6. Podsumowanie
Co to jest Stacking Gel?
Żel do układania w stosy to nisko stężony żel poliakryloamidowy, który jest nakładany na bardziej skoncentrowany żel rozdzielający (żel rozdzielający) w technice SDS-PAGE. Żel do układania w stosy służy do poprawy rozdzielczości elektroforezy. Rozdzielczość wzrasta ze względu na różnicę między stężeniami żelu układającego i żelu rozdzielającego, które wpływają na białka w próbce. Ponieważ stężenie poliakryloamidu w żelu do układania w stosy jest niskie, wielkość porów jest większa. Pomaga to również w zwiększeniu separacji.
Żel do układania w stosy jest luźnym żelem poliakryloamidowym z dużymi porami około 7% poliakryloamidu. Pory te nie stanowią znaczącej bariery dla dużych cząsteczek białka. Dlatego żel ten wpływa nieznacznie na ruchliwość tych białek. To sprawia, że rozdział następuje zgodnie z ruchliwością i rozmiarem białka poprzez koncentrację między dwoma żelami.
Rycina 01: Żel akrylamidowy SDS-PAGE
Wartość pH żelu do układania w stos wynosi 6,8. Jego pH jest kwaśne niż w przypadku rozdzielania żelu o 2 jednostki pH. To pH oznacza niższą siłę jonową, a zatem wyższą oporność elektryczną. To wywołuje mobilność białek niż innych naładowanych cząstek obecnych w żelu.
Co to jest żel rozdzielający?
Żel rozdzielający lub żel rozdzielający w technice SDS-PAGE to wysoko skoncentrowany żel poliakryloamidowy, który umieszcza się na wierzchu nisko stężonego żelu do układania w stosy. Żel rozdzielający zawiera dużą ilość poliakryloamidu (10%). PH tego żelu utrzymuje się na poziomie pH = 8,8, co jest wyższym poziomem pH niż żelu do układania w stos.
Rycina 02: Aparat do elektroforezy żelowej
Gdy cząsteczki białka osiągają żel rozdzielający, migracja tych cząsteczek jest spowalniana, ponieważ żel rozdzielający jest żelem o wysokim stężeniu z małymi porami, który może działać jako znacząca bariera dla ruchu cząsteczek białka. To spowolnienie pozwala pozostałym białkom migrować powoli, aby nadrobić zaległości, co skutkuje wąskim, skoncentrowanym pasmem pomiędzy dwoma żelami.
Jaki jest związek między żelem układającym a żelem rozdzielającym?
- Zarówno żel do układania w stos, jak i żel rozdzielający są stosowane w tym samym urządzeniu.
Jaka jest różnica między żelem układającym a żelem rozdzielającym?
Żel do układania w stos vs żel rozdzielający | |
| Żel do układania w stosy to nisko stężony żel poliakryloamidowy, który jest nakładany na bardziej skoncentrowany żel rozdzielający (żel rozdzielający) w technice SDS-PAGE. | Żel rozdzielający lub żel rozdzielający w technice SDS-PAGE to wysoko skoncentrowany żel poliakryloamidowy, który umieszcza się na wierzchu nisko stężonego żelu do układania w stosy. |
| Umieszczenie | |
| Żel do układania w stos umieszcza się na żelu rozdzielającym (rozdzielającym). | Żel rozdzielający umieszcza się na dnie pojemnika używanego do elektroforezy żelowej. |
| Stężenie | |
| Stężenie żelu układającego się w stos jest wysokie. | Stężenie żelu rozdzielającego jest niskie. |
| Zawartość poliakryloamidu | |
| Żel do układania w stos zawiera około 7% poliakryloamidu. | Żel rozdzielający zawiera około 10% poliakryloamidu. |
| pH | |
| Wartość pH żelu do układania w stos wynosi 6,8. | PH żelu rozdzielającego wynosi 8,8. |
| Rozmiar porów | |
| Duże rozmiary porów są obecne w żelu do układania w stosy. | Małe rozmiary porów są obecne w żelu rozdzielającym. |
| Rozkład | |
| Żel do układania w stosy daje lepszą rozdzielczość. | Żel rozdzielający daje słabą rozdzielczość. |
streszczenie - Stacking Gel vs Separating Żel
Żel do układania w stos i żel do rozdzielania to dwa rodzaje żeli poliakryloamidowych stosowanych w celu lepszego oddzielenia cząsteczek białka w danej próbce. Różnica między żelem układającym w stos a żelem rozdzielającym polega na tym, że pH żelu układającego wynosi 6,8, podczas gdy pH żelu rozdzielającego wynosi 8,8.
Odniesienie:
1. „Elektroforeza w żelu poliakryloamidowym”. Elektroforeza w żelu poliakryloamidowym (teoria): Biologia molekularna Virtual Lab II: Biotechnologia i inżynieria biomedyczna: Amrita Vishwa Vidyapeetham Virtual Lab. Dostępny tutaj
2. „Jak działa SDS-PAGE”. Bitesize Bio, 16 lutego 2018. Dostępne tutaj
3. „Żel do układania w stosy SDS-PAGE - BICH 608 (Polymenis-Pettigrew).” Witryny Google. Dostępny tutaj
Zdjęcie dzięki uprzejmości:
1.'SDS-PAGE Akrylamid żel 'Przez Bensaccount z angielskiej Wikipedii (CC BY 3.0) przez Commons Wikimedia
2. „Aparat do elektroforezy żelowej” Autor: Jeffrey M. Vinocur - Praca własna (CC-BY 2.5) przez Commons Wikimedia
