Różnica między nitrocelulozą a PVDF

Kluczowa różnica - nitroceluloza vs PVDF
 

Western blotting to metoda umożliwiająca wykrywanie i kwantyfikację określonych białek z próbki białka. Niezawodność techniki zależy od wyboru właściwej membrany do wchłaniania białek z żelu. Istnieją różne rodzaje mikroporowatych membran. Membrany nitrocelulozowe i PVDF są dwiema membranami preferowanymi przez badaczy ze względu na ich szczególne właściwości w porównaniu z innymi rodzajami membran. Wybór między nitrocelulozą lub PVDF jest również kolejnym wyzwaniem w western blotting. Zarówno nitroceluloza, jak i PVDF mają wysoką zdolność absorpcji białka. Kluczowa różnica między membraną nitrocelulozową a PVDF polega na tym membrany nitrocelulozowe nie mają zdolności do usuwania przeciwciał i ponownego wykorzystywania membrany do ponownego wykrywania przeciwciał, podczas gdy membrany PVDF mają zdolność usuwania i ponownego wykorzystywania.

ZAWARTOŚĆ
1. Przegląd i kluczowa różnica
2. Co to jest nitroceluloza
3. Co to jest PVDF
4. Porównanie obok siebie - nitroceluloza vs PVDF
5. Podsumowanie

Co to jest nitroceluloza?

Nitroceluloza jest polimerem wytwarzanym przez obróbkę celulozy kwasem azotowym i jest stosowana do wytwarzania mikroporowatych błon w biologii molekularnej, szczególnie w technikach blotowania, takich jak blotting południowy, północny i zachodni. Rozmiary porów membran nitrocelulozowych wynoszą od 3 do 20 µm. Mikroporowate błony nitrocelulozowe ułatwiają wykrycie reakcji immunochemicznej zachodzącej na powierzchni błony. Dlatego membrany nitrocelulozowe są często stosowane do unieruchamiania białek i wykrywania specyficznych białek w western blotting. Błony nitrocelulozowe mogą również unieruchomić glikoproteiny i kwasy nukleinowe.

Membrany nitrocelulozowe są preferowane w testach przepływu bocznego ze względu na kilka cech. Membrany nitrocelulozowe absorbują białka w wysokim stężeniu. Rozpuszczalnik użyty do zwilżenia membrany nie zmniejsza absorpcji białka przez membranę nitrocelulozową. Membrany nitrocelulozowe można łatwo przyciąć do pożądanego rozmiaru żelu i przenieść białka z żelu na membranę za pomocą transferu elektrycznego lub kapilarnego. Nitroceluloza umożliwia szybszy przepływ białek przez błonę o wysokim potencjale wiązania. Nitroceluloza wykazuje lepszą wytrzymałość na manipulacje. Inną specjalną cechą membrany nitrocelulozowej jest to, że można ją łatwo przykleić nierozpuszczalnikowymi klejami wodoodpornymi do różnych plastikowych podkładów.

Rycina 01: Membrana nitrocelulozowa do analizy Western

Co to jest PVDF?

Difluorek poliwinylidenu (PVDF) jest fluoropolimerem wytwarzanym przez polimeryzację difluorku winylidenu i ma wysoką zdolność do immobilizacji białek. Dlatego mikroporowate błony wykonane z PVDF są stosowane w technikach western blot do analizy konkretnych białek z mieszanin białek. Membrany PVDF można również stosować do analizy aminokwasów i sekwencjonowania białek. Najważniejszą cechą membrany PVDF w stosunku do membrany nitrocelulozowej jest to, że można ją łatwo zdjąć z przeciwciał i użyć ponownie w kolejnych sondach przeciwciał.

Membrany PVDF są grubsze niż membrany nitrocelulozowe; stąd bardziej odporny na uszkodzenia podczas ponownego użycia. Membrany PVDF są wysoce hydrofobowe. Dlatego przed użyciem należy je namoczyć w metanolu lub izopropanolu.

Jaka jest różnica między nitrocelulozą a PVDF?

Nitroceluloza vs PVDF
Nitroceluloza jest polimerem złożonym z celulozy.	PVDF jest fluoropolimerem wytwarzanym przez polimeryzację difluorku winylidenu.
Rozmiar porów membrany
Typowe rozmiary porów wynoszą 0,1, 0,2 lub 0,45 μ	Typowe rozmiary porów wynoszą 0,1, 0,2 lub 0,45 μm
Zdolność wiązania białka
Nitroceluloza ma zdolność wiązania białka od 80 do 100 μg / cm2).	PVDF ma zdolność wiązania białka od 170 do 200 μg / cm2).
Wrażliwość
Ma to niską czułość w porównaniu do PVDF.	Ma to wysoką czułość.
Wykrywanie słabo wyrażonych białek
Ponieważ czułość jest niska w błonach nitrocelulozowych, nie nadaje się do wykrywania białek o niskiej ekspresji.	Jest to bardziej odpowiednie do wykrywania białek o niskiej ekspresji ze względu na wysoką czułość.
Szum
Ma to niższy szum tła	Ma to większy szum tła.
Interakcje z białkami
Cząsteczki białka wiążą się z błonami nitrocelulozowymi poprzez interakcje hydrofobowe.	Białka wiążą się z membranami PVDF poprzez interakcje hydrofobowe i dipolowe.
Natura błony
Nitroceluloza jest krucha i krucha. Dostępne są jednak wersje nitrocelulozy i są one odporne.	PVDF jest bardziej trwały i ma wyższą odporność chemiczną.
Możliwość rozebrania i ponownego użycia
Nitroceluloza może mieć trudności z usuwaniem i ponownym profilowaniem bez utraty sygnału.	PVDF jest idealny do przeprogramowywania i sekwencjonowania.
Stosowność
Nitroceluloza jest idealna do wykrywania białek o niskiej masie cząsteczkowej.	PVDF jest bardziej odpowiedni do wykrywania białek o wyższej masie cząsteczkowej.
Inne zastosowania
Nitrocelulozę można stosować do analizy kwasu nukleinowego i analizy punktowej / szczelinowej.	PVDF może być stosowany do sekwencjonowania białek i systemów oznaczania fazy stałej.
Koszt
Jest to tańsze niż membrany PVDF.	Jest to droższe niż membrany nitrocelulozowe.
Potrzeba wstępnego zwilżenia
Membrany nitrocelulozowe nie wymagają wstępnego nałożenia metanolu	Membrany PVDF wymagają wstępnego nałożenia metanolu.

Podsumowanie - nitroceluloza vs PVDF

Membrany nitrocelulozowe były pierwszymi membranami stosowanymi w handlu do testu przepływu bocznego. Mają wysoką zdolność do wchłaniania białek. Dlatego membrany nitrocelulozowe stosuje się w western blottingu. PVDF jest innym rodzajem błony stosowanym w western blottingu i ma również wysoką zdolność wchłaniania białka. Oba typy są stosowane w western blotting do analizy białek. Jednak membrany PVDF mają bardziej specjalne atrybuty, dzięki czemu są bardziej odpowiednie niż membrany nitrocelulozowe do western blottingu. Ale membrany nitrocelulozowe są bardziej odpowiednie do wykrywania białek o niskiej masie cząsteczkowej, membrany PVDF są bardziej odpowiednie do wykrywania białek o wysokiej masie cząsteczkowej. Jest to różnica między membranami nitrocelulozowymi i PVDF.

Zdjęcie dzięki uprzejmości:
1. „Western blot transfer” Autor: Bensaccount z angielskiej Wikipedii (CC BY 3.0) przez Commons Wikimedia

Odniesienie:
1.Luque-Garcia, Jose L., Ge Zhou, Tung-Tien Sun i Thomas A. Neubert. „Zastosowanie membran nitrocelulozowych do charakteryzacji białek za pomocą spektrometrii masowej desorpcji / jonizacji laserowej wspomaganej matrycą”. Chemia analityczna. U.S. National Library of Medicine, 15 lipca 2006 r. Internet. 28 marca 2017 r
2. „Markery molekularne i biotechnologia roślin”. Książki Google. N.p., n.d. Sieć. 28 marca 2017 r
3. poniedziałek, 8 kwietnia 2013 Tweet. „Magia w membranie: wybierz mądrze, aby uzyskać wyniki Best Western Blot.” Biokompare. N.p., 08 kwietnia 2013. Web. 28 marca 2017 r