Różnica między nitrocelulozą a membraną nylonową

Kluczowa różnica - nitroceluloza vs membrana nylonowa
 

Blotting jest ważną techniką wykrywania określonych sekwencji DNA, RNA i białek z ich mieszanin w biologii molekularnej. Odbywa się to za pomocą membrany zwanej blot. Istnieją różne techniki blottingu, takie jak blotting północny, południowy i zachodni. Wybierając odpowiednią membranę do procesu blotowania, należy starannie zrobić, aby zapobiec niespecyficznemu wiązaniu i nieprawidłowemu wykrywaniu. Nitroceluloza, nylon i PVDF są powszechnie stosowanymi membranami w technikach blottingu. Mają różne cechy. Kluczowa różnica między membraną nitrocelulozową a nylonową polega na tym membrany nitrocelulozowe mają wysoki potencjał immobilizacji białka natomiast membrany nylonowe mają wysoki potencjał immobilizacji kwasu nukleinowego. Jednak oba typy membran są często stosowane w technikach blottingu.

ZAWARTOŚĆ
1. Przegląd i kluczowa różnica
2. Co to jest membrana nitrocelulozowa
3. Co to jest membrana nylonowa
4. Porównanie obok siebie - nitroceluloza vs membrana nylonowa
5. Podsumowanie

Co to jest membrana nitrocelulozowa?

Membrana nitrocelulozowa jest powszechnie stosowanym filtrem membranowym w technikach analizy kwasów nukleinowych i białek. Ma wysoki potencjał wiązania białka. Dlatego membrany nitrocelulozowe są szeroko stosowane w technice western blotting. Membrany nitrocelulozowe są kompatybilne ze wszystkimi technikami hybrydyzacji i wykazują lepsze zdolności wiązania bez zakłóceń. Membrany nitrocelulozowe są z natury hydrofilowe. Wywołują interakcje hydrofilowe z cząsteczkami i skutecznie unieruchamiają je na membranie. Dostępne w handlu membrany nitrocelulozowe są dostępne w dwóch rozmiarach porów: 0,45 i 0,2 µm.

Rycina 01: Membrana nitrocelulozowa stosowana w western blottingu

Co to jest membrana nylonowa?

Membrana nylonowa jest innym rodzajem komercyjnej membrany stosowanej w technikach blottingu. Alternatywnie stosuje się go z membranami nitrocelulozowymi do blottingu południowego i północnego. Membrany nylonowe są idealne do blottingu południowego niż nitroceluloza ze względu na ich wysokie powinowactwo do wiązania z DNA. Ze względu na kilka unikalnych cech membran nylonowych badacze zwykle stosują membrany nylonowe do blottingu południowego i północnego zamiast błony nitrocelulozowej. W przeciwieństwie do nitrocelulozy zalecane są również membrany nylonowe do zdejmowania izolacji i ponownego profilowania.

Rycina 02: Membrana nylonowa stosowana do blottingu południowego

Jaka jest różnica między nitrocelulozą a membraną nylonową?

Nitroceluloza kontra membrana nylonowa
Membrany nitrocelulozowe są kruche.	Membrany nylonowe są mniej kruche.
Obsługa
Są trudne w obsłudze.	Są łatwe w obsłudze.
Reprobing
Trudno przeprogramować nieobsługiwane membrany nitrocelulozowe.	Reprobowanie jest łatwe dzięki nylonowym membranom.
Zgodność z różnymi warunkami przechowywania
Membrany nitrocelulozowe mają mniejszą wytrzymałość na różne warunki przechowywania.	Membrany nylonowe lepiej reagują na różne warunki przechowywania.
Posługiwać się
Wymagane jest wstępne zwilżanie.	Zwilżanie wstępne nie jest wymagane w przypadku membran nylonowych.
Charakter hydrofilowy
Membrany nitrocelulozowe mają charakter hydrofilowy, ale są mniej hydrofilowe niż membrany nylonowe.	Są z natury wysoce hydrofilowe.
Potencjał unieruchomienia
Membrany nitrocelulozowe mają mniejsze powinowactwo do kwasów nukleinowych. Ale ma wysokie powinowactwo do białek.	Membrany nylonowe mają wysoki potencjał wiązania z kwasami nukleinowymi niż membrany nitrocelulozowe.

Podsumowanie - nitroceluloza vs membrana nylonowa

Membrany nitrocelulozowe i nylonowe są specjalnymi arkuszami stosowanymi w technice blottingowej w celu odtworzenia wzoru paskowania na żelu. Umożliwiają wykrycie określonej sekwencji lub białka z mieszanin poprzez unieruchomienie ich na błonie. Po immobilizacji cząsteczek na błonie można ją wykorzystać jako substrat do analizy hybrydyzacji ze znakowanymi sondami. Membrana nitrocelulozowa jest powszechnie stosowana do wykrywania białek w technice western blot ze względu na jej wysokie powinowactwo wiązania z białkami. Membrany nylonowe są często używane do blottingu południowego i północnego. To jest różnica między nitrocelulozą a membraną nylonową.

Bibliografia:
1. Hayes, P. C., C. R. Wolf i J. D. Hayes. „Techniki blottingu do badania DNA, RNA i białek”. BMJ: British Medical Journal. U.S. National Library of Medicine, 14 października 1989. Web. 07 kwietnia 2017 r
2. Mahmood, Tahrin i Ping-Chang Yang. „Western Blot: technika, teoria i rozwiązywanie problemów”. North American Journal of Medical Sciences. Medknow Publications & Media Pvt Ltd, wrzesień 2012. Internet. 07 kwietnia 2017 r

Zdjęcie dzięki uprzejmości:
1. „Western blot transfer” Autor: Bensaccount z angielskiej Wikipedii (CC BY 3.0) przez Commons Wikimedia