Różnica między immunofluorescencją a immunohistochemią

Kluczowa różnica - immunofluorescencja vs immunohistochemia
 

Diagnostyka chorób, która wykorzystuje molekularne metody biologiczne, stała się nowym obszarem klinicznej technologii laboratoryjnej. Obejmuje wszystkie testy i metody identyfikacji choroby i zrozumienia przyczyny choroby poprzez analizę DNA, RNA lub białka ulegającego ekspresji w organizmie. Szybki postęp w diagnostyce molekularnej umożliwił podstawowe badania chorób zakaźnych i niezakaźnych. Służą one do określania zmian w sekwencji lub poziomie ekspresji kluczowych genów lub białek zaangażowanych w chorobę. Immunofluorescencja (IF) i immunohistochemia (IHC) to dwie tak szeroko stosowane techniki w biologii raka. IF jest rodzajem IHC, w którym stosuje się metodę wykrywania fluorescencji do analizy przeciwciał monoklonalnych i poliklonalnych, podczas gdy IHC wykorzystuje metody chemiczne do wykrywania przeciwciał monoklonalnych i poliklonalnych. Jest to kluczowa różnica między IF a IHC.

ZAWARTOŚĆ

1. Przegląd i kluczowa różnica
2. Co to jest immunofluorescencja 
3. Co to jest immunohistochemia
4. Podobieństwa między immunofluorescencją a immunohistochemią
5. Porównanie obok siebie - Immunofluorescencja vs immunohistochemia w formie tabelarycznej
6. Podsumowanie

Co to jest immunofluorescencja (IF)?

Immunofluorescencja to technika wykrywania, w której przeciwciała stosowane w teście są znakowane przy użyciu barwników fluorescencyjnych lub białek fluorescencyjnych do celów wykrywania. Znakowane wtórne przeciwciała mogą powodować niepożądane sygnały tła; dlatego technika IF polega na znakowaniu samego pierwotnego przeciwciała w celu uniknięcia niepożądanych sygnałów podczas wykrywania. Dzięki tej technice zapobiega się niespecyficznemu wiązaniu między pierwszorzędowym a drugorzędowym przeciwciałem i jest ono szybsze, ponieważ nie jest zaangażowany wtórny etap inkubacji. Poprawiona jest również jakość danych.

Rycina 01: Podwójne barwienie immunofluorescencyjne dla BrdU, NeuN i GFAP

Fluorochromy lub barwniki fluorescencyjne to związki, które mogą absorbować promieniowanie, najlepiej promieniowanie ultrafioletowe, które jest wzbudzone. Kiedy cząstki osiągają stan gruntu ze stanu wzbudzonego, emitują promieniowanie, które jest wychwytywane i wykrywane przez detektor w celu utworzenia widma. Bardzo ważne jest, aby znacznik fluorescencyjny był kompatybilny i stabilny dla konkretnej reakcji i powinien być odpowiednio sprzężony z przeciwciałem w celu uzyskania dokładnych wyników. Jednym z najczęściej stosowanych fluorochromów jest izotiocyjanian fluoresceiny (FITC), który ma zielony kolor, a szczytowe długości fali absorpcji i emisji wynoszą odpowiednio 490 nm i 520 nm. Rodamina, inny środek stosowany w IF, ma kolor czerwony i ma wyraźne szczytowe długości fali absorpcji i emisji 553 nm i 627 nm.

Co to jest immunohistochemia (IHC)?

IHC jest metodą badań molekularnych praktykowaną w celu identyfikacji i potwierdzenia obecności antygenu w komórce docelowej. Komórka docelowa może być cząsteczką zakaźną, patogenem drobnoustrojowym lub złośliwą komórką nowotworową. IHC wykorzystuje przeciwciała monoklonalne i poliklonalne do określenia obecności antygenów obecnych na powierzchni komórek docelowych. Technika ta opiera się na wiązaniu antygen-przeciwciało. Marker wykrywający jest sprzężony z tymi przeciwciałami w celu wykrycia obecności lub braku konkretnego antygenu. Markery te mogą być markerami chemicznymi, takimi jak enzymy, przeciwciała znakowane fluorescencyjnie lub przeciwciała znakowane radioaktywnie.

Rycina 02: Plasterek myszy i mózgu zabarwiony metodą immunohistochemiczną

Najpopularniejszym zastosowaniem IHC jest biologia komórek nowotworowych w celu identyfikacji obecności nowotworów złośliwych, ale jest on również stosowany do wykrywania chorób zakaźnych.

Jakie są podobieństwa między immunofluorescencją a immunohistochemią?

• Immunofluorescencja i immunohistochemia zachodzą w warunkach in vitro.
• Obie techniki oparte są na antygenie-przeciwciele
• Obie są bardzo szybkimi technikami.
• Wyniki tych technik są odtwarzalne.
• Obie poprawiły jakość danych.
• Te techniki stosowane w diagnostyce raka i chorób zakaźnych.

Jaka jest różnica między immunofluorescencją a immunohistochemią?

Immunofluorescencja a immunohistochemia
IF jest techniką wykrywania, w której przeciwciała stosowane w teście są znakowane przy użyciu barwników fluorescencyjnych lub białek fluorescencyjnych do wykrywania.	IHC to technika wykrywania, w której przeciwciała stosowane w teście są znakowane przy użyciu chemikaliów lub pierwiastków radioaktywnych do wykrywania.
Precyzja
Dokładność jest wyższa w technice IF w porównaniu do IHC.	Dokładność jest niższa w IHC.
Specyficzność
JEŻELI jest bardziej szczegółowy.	IHC jest mniej szczegółowe.

Podsumowanie - Immunofluorescencja vs immunohistochemia

Mechanizmy molekularne spowodowały wiele zmian w dziedzinie medycyny, co doprowadziło do powstania zaawansowanych metod badań molekularnych, które doprowadziły do ​​rewolucji w dziedzinie diagnostyki. Wynalazki te doprowadziły do ​​szybkiej i dokładnej identyfikacji i potwierdzenia choroby, umożliwiając w ten sposób skuteczne podawanie i produkcję leków. Techniki te są również stosowane w farmakologii, aby znaleźć cele leków i potwierdzić właściwości farmakokinetyczne leku podczas metabolizmu leku. IF i IHC to dwie metody diagnostyczne oparte na koncepcji wiązania antygenu i przeciwciała, chociaż sposób wykrywania w obu technikach jest różny. IF wykorzystuje zasadę fluorescencji do wykrywania antygenu, a IHC stosuje koniugację chemiczną do wykrywania antygenu. To jest różnica między IF a IHC.

Pobierz wersję PDF immunofluorescencji kontra immunohistochemia

Możesz pobrać wersję PDF tego artykułu i używać go do celów offline zgodnie z cytatem. Pobierz wersję PDF tutaj Różnica między immunofluorescencją a immunohistochemią.

Bibliografia:

1. Aoki, Valéria i in. „Bezpośrednia i pośrednia immunofluorescencja”. Anais Brasileiros de Dermatologia, SociedadeBrasileira de Dermatologia, dostępne tutaj. Dostęp 25 sierpnia 2017 r.
2. Duraiyan, Jeyapradha, i in. „Zastosowania immunohistochemii”. Journal of Pharmacy & Bioallied Sciences, Medknow Publications & Media Pvt Ltd, sierpień 2012, dostępny tutaj. Dostęp 25 sierpnia 2017 r.

Zdjęcie dzięki uprzejmości:

1. „Podwójne barwienie immunofluorescencyjne dla BrdU, NeuN i GFAP” Ma Ma, Ma Y, Yi X, Guo R, Zhu W, Fan X, Xu G, Frey WH 2nd, Liu X. - Donosowe dostarczenie transformującego czynnika wzrostu beta1 u myszy po udarze zmniejsza objętość zawału i zwiększa neurogenezę w strefie podkomorowej; PMID 19077183 (CC BY 2.0) przez Commons Wikimedia
2. „Podwzgórze tkanki myszy zabarwione przez ABC-Immunohistochemia” Autor: zabbn - Praca własna (CC BY-SA 3.0) przez Commons Wikimedia