Różnica między bezpośrednią i pośrednią immunofluorescencją

The kluczowa różnica pomiędzy bezpośrednią i pośrednią immunofluorescencją jest to, że bezpośrednia immunofluorescencja wykorzystuje pojedyncze przeciwciało, które działa przeciwko docelowemu celowi, podczas gdy pośrednia immunofluorescencja wykorzystuje dwa przeciwciała do znakowania docelowego celu.

Immunofluorescencja lub obrazowanie komórkowe to technika stosowana do znakowania określonego docelowego antygenu za pomocą fluoroforu. W tym przypadku fluorofor jest fluorescencyjnym związkiem chemicznym, który może ponownie emitować światło po wzbudzeniu światłem. Gdy fluorofor wiąże się z docelowym antygenem, umożliwia wykrycie docelowej cząsteczki w próbce. Aby to opisać dalej, gdy antygen wiąże się ze specyficznym przeciwciałem, można go skoniugować z fluoroforami. Dlatego łatwo jest wykryć obecność docelowego antygenu w próbce podczas obserwacji pod mikroskopem fluorescencyjnym.

Poza tym istnieją dwa rodzaje immunofluorescencji; bezpośrednia i pośrednia immunofluorescencja. Różnica między bezpośrednią i pośrednią immunofluorescencją polega głównie na liczbie zastosowanych przeciwciał i koniugacji fluoroforu. Oznacza to, że w bezpośredniej immunofluorescencji fluorofor jest bezpośrednio sprzężony z pierwotnym przeciwciałem, natomiast w pośredniej immunofluorescencji - fluorofor sprzężony z drugorzędowym przeciwciałem.

ZAWARTOŚĆ

1. Przegląd i kluczowa różnica
2. Co to jest bezpośrednia immunofluorescencja
3. Co to jest pośrednia immunofluorescencja
4. Podobieństwa między immunofluorescencją bezpośrednią a pośrednią
5. Porównanie obok siebie - Immunofluorescencja bezpośrednia vs pośrednia w formie tabelarycznej
6. Podsumowanie

Co to jest bezpośrednia immunofluorescencja?

Immunofluorescencja wykorzystuje przeciwciała do wykrywania określonych docelowych antygenów. Bezpośrednia immunofluorescencja jest jednym z dwóch rodzajów immunofluorescencji. W bezpośredniej immunofluorescencji pojedyncze przeciwciało (przeciwciało pierwotne) obejmuje i fluorofor bezpośrednio sprzęga się z przeciwciałem pierwotnym. Po związaniu przeciwciała z docelowym antygenem fluorofor emituje fluorescencję, którą można wykryć pod mikroskopem fluorescencyjnym.

Rycina 01: Bezpośrednia immunofluorescencja

Jednak bezpośrednia immunofluorescencja jest kosztowną metodą, ponieważ pierwotne sprzężone przeciwciała są kosztowne w porównaniu z przeciwciałami wtórnymi. Niemniej jednak nie wymaga dodatkowego kroku, a zatem krótszej techniki. Ponadto niespecyficzne wiązania są zmniejszone w bezpośredniej immunofluorescencji. Stąd reaktywność krzyżowa gatunków jest niska. Ale w wykrywaniu czułość bezpośredniej immunofluorescencji jest słaba w porównaniu do pośredniej immunofluorescencji .

Co to jest pośrednia immunofluorescencja?

Pośrednia immunofluorescencja jest drugim rodzajem immunofluorescencji, która obejmuje dwa rodzaje przeciwciał, takie jak przeciwciała pierwotne i wtórne w znakowaniu docelowego antygenu. W tej metodzie fluorofor sprzęga się z drugorzędowym przeciwciałem. Dlatego ta technika wymaga dodatkowego kroku.

Rycina 02: Immunofluorescencja

Jednak czułość jest wysoka w tej metodzie, ponieważ kilka fluoroforów można skoniugować z przeciwciałami wtórnymi i ułatwia to wykrywanie. Ponadto pośrednia immunofluorescencja jest tańsza ze względu na fakt, że sprzęganie wtórnych przeciwciał jest tańsze i łatwiejsze. W porównaniu z bezpośrednią immunofluorescencją reaktywność krzyżowa gatunków jest wysoka w metodzie pośredniej.

Jakie są podobieństwa między immunofluorescencją bezpośrednią a pośrednią?

• Są to dwa rodzaje technik immunofluorescencyjnych.
• Pierwotne przeciwciała i fluorofor biorą udział w obu metodach.
• Również reakcja antygen-przeciwciało zachodzi w obu metodach.
• Ponadto, zarówno bezpośrednia, jak i pośrednia immunofluorescencja wykorzystuje mikroskop fluorescencyjny do wykrywania antygenu.

Jaka jest różnica między immunofluorescencją bezpośrednią a pośrednią?

Immunofluorescencja może być bezpośrednia lub pośrednia w oparciu o koniugację fluoroforu z zastosowanymi przeciwciałami. W bezpośredniej immunofluorescencji fluorofor sprzęga się z pierwotnym przeciwciałem, które jest pojedynczym przeciwciałem zaangażowanym w tę technikę. W przeciwieństwie do tego, w pośredniej immunofluorescencji fluorofor sprzęga się z drugorzędowym przeciwciałem, które jest jednym z dwóch rodzajów przeciwciał zaangażowanych w tę technikę. Dlatego główną różnicą między bezpośrednią i pośrednią immunofluorescencją jest rodzaj przeciwciała, który sprzęga się z fluoroforem.

Poniższa infografika przedstawia porównanie różnic między bezpośrednią i pośrednią immunofluorescencją.

Podsumowanie - Immunofluorescencja bezpośrednia a pośrednia

Immunofluorescencja to technika stosowana do wykrywania obecności określonych antygenów w próbce. Ta technika wykorzystuje specyficzne przeciwciała. Dlatego w tym celu przeciwciała sprzęgają się z fluoroforami w celu ich wykrycia za pomocą mikroskopu fluorescencyjnego. Ponadto istnieją dwa rodzaje immunofluorescencji, mianowicie bezpośrednia i pośrednia immunofluorescencja. Bezpośrednia immunofluorescencja obejmuje pojedyncze przeciwciało i fluorofor bezpośrednio skoniugowane z tym przeciwciałem. Pośrednia immunofluorescencja obejmuje dwa przeciwciała; pierwszorzędowy i wtórny oraz fluorofor skoniugowane z drugorzędowym przeciwciałem. Ponieważ kilka drugorzędnych przeciwciał może wiązać się z pierwotnym przeciwciałem, a kilka fluoroforów może sprzęgać się z drugorzędowymi przeciwciałami, pośrednia immunofluorescencja jest metodą bardziej czułą niż metoda bezpośrednia. Ponadto metoda pośrednia jest tańsza niż metoda bezpośrednia. Jest to zatem różnica między bezpośrednią i pośrednią immunofluorescencją.

Odniesienie:

1. „Immunofluorescencja”. Wikipedia, Wikimedia Foundation, 19 sierpnia 2018. Dostępne tutaj 

Zdjęcie dzięki uprzejmości:

1. „HSP IF IgA” Autor: Emmanuelm z en.wikipedia, (CC BY 3.0) przez Commons Wikimedia
2. „Immunofluorescencja” Autor: Westhayl618 - Praca własna (CC BY-SA 4.0) przez Commons Wikimedia