Różnica między bezpośrednim a pośrednim testem ELISA

Kluczowa różnica - bezpośredni vs pośredni test ELISA
 

Test immunoenzymatyczny (ELISA), znany również jako test immunoenzymatyczny, jest testem serologicznym wykrywającym przeciwciała we krwi. Służy jako narzędzie diagnostyczne, aby dowiedzieć się, czy pacjent był narażony na określony typ wirusa lub innego czynnika zakaźnego (antygen) i czy organizm wytworzył przeciwciała przeciwko infekcji. ELISA może także zidentyfikować przeszłe i obecne infekcje. Dlatego lekarze często stosują test ELISA jako wstępny test wstępny przed dogłębną analizą chorób. Ten test można wykonać w laboratorium, pobierając od pacjenta próbkę krwi. Istnieją dwa rodzaje testu ELISA: bezpośredni test ELISA i pośredni test ELISA. Kluczowa różnica między bezpośrednim a pośrednim testem ELISA polega na tym pośredni test ELISA jest bardziej czuły i wymaga dodania drugiego przeciwciała podczas bezpośredni test ELISA jest mniej wrażliwy i wykorzystuje tylko pierwotne przeciwciało.

ZAWARTOŚĆ
1. Przegląd i kluczowa różnica
2. Co to jest bezpośredni test ELISA
3. Co to jest pośredni test ELISA
4. Porównanie obok siebie - Bezpośredni vs pośredni test ELISA
5. Podsumowanie

Co to jest bezpośredni test ELISA?

ELISA to test diagnostyczny przeprowadzany w celu wykrycia obecności określonych antygenów lub przeciwciał we krwi. Odbywa się to jako test płytkowy. Wykorzystuje przeciwciała związane z łatwo oznaczanymi enzymami. Obecność antygenów w próbce surowicy wiąże się ze specyficznymi przeciwciałami związanymi z enzymami. W ostatnim etapie dodaje się określony substrat w celu przereagowania z enzymem. Enzym przekształca substrat w kolorowy lub wytwarzający sygnał produkt. Zmiana koloru w podłożu chemicznym ujawnia obecność określonego przeciwciała w próbce surowicy. Bezpośredni test ELISA wykorzystuje tylko pierwotne przeciwciało połączone z enzymem. Po związaniu z antygenem szybko zmienia kolor, co wskazuje na obecność czynnika zakaźnego we krwi. Jednak intensywność sygnałów jest mniejsza w bezpośrednim teście ELISA, ponieważ epitopy są ograniczone do wiązania antygenów. Dlatego bezpośredni test ELISA jest mniej czuły w porównaniu do pośredniego testu ELISA.

Rycina 01: Bezpośredni test ELISA

Co to jest pośredni test ELISA?

Test ELISA można przeprowadzić przy użyciu dwóch rodzajów przeciwciał, a mianowicie; pierwotne przeciwciało i wtórne przeciwciało. Pośrednie narzędzie ELISA wykorzystuje oba typy przeciwciał do wzmocnienia sygnałów w celu lepszego wykrycia. Pośrednią technikę ELISA przeprowadza się w następujący sposób.

1. Płytki inkubuje się z antygenami i przemywa, aby zablokować niespecyficzne wiązanie.
2. Następnie dodaje się pierwotne przeciwciała i przemywa.
3. Drugorzędowe przeciwciało połączone z enzymem dodaje się i przemywa.
4. Dodaje się substrat i pozostawia do reakcji z enzymami.
5. Sygnały są wykrywane i identyfikowana jest obecność lub brak określonego antygenu w próbce.

W pośrednim teście ELISA kilka drugorzędowych przeciwciał może wiązać się z jednym pierwotnym przeciwciałem. Wtórne przeciwciała są połączone z łatwo testowanymi enzymami. Dlatego jedno wiązanie może dać silny sygnał z powodu więcej niż jednej interakcji. Dlatego pośredni test ELISA jest bardziej czuły niż bezpośredni test ELISA. Jednak pośredni test ELISA może generować niespecyficzne sygnały z powodu reakcji krzyżowych wtórnych przeciwciał.

Rycina 02: Pośredni test ELISA

Jaka jest różnica między bezpośrednim a pośrednim testem ELISA?

Bezpośredni vs pośredni test ELISA
Bezpośredni test ELISA jest mniej czuły w porównaniu do pośredniego testu ELISA.	Pośredni test ELISA jest bardziej czuły.
Zajęty czas
Bezpośredni test ELISA to szybki proces.	Pośredni test ELISA jest czasochłonny.
Zastosowanie przeciwciał
W bezpośrednim teście ELISA stosuje się tylko jeden rodzaj przeciwciał (przeciwciała pierwotne).	Pierwotne i wtórne przeciwciała stosuje się w pośrednim teście ELISA.
Link do enzymów
Pierwotne przeciwciała są powiązane z enzymami.	Wtórne przeciwciała są połączone z enzymami.
Reaktywność krzyżowa drugich przeciwciał
Bezpośredni test ELISA eliminuje reaktywność krzyżową drugich przeciwciał.	Na pośredni test ELISA wpływa reaktywność krzyżowa drugich przeciwciał.
Sygnały
Sygnały są słabe w porównaniu do pośredniego testu ELISA.	Sygnały są wzmacniane w pośrednim teście ELISA. Dlatego jest łatwy do wykrycia.

Podsumowanie - Bezpośredni vs pośredni test ELISA

ELISA jest techniką biochemiczną stosowaną głównie w immunologii do wykrywania obecności przeciwciała lub antygenu w próbce krwi pacjenta. Można to przeprowadzić za pomocą dwóch procesów znanych jako bezpośredni lub pośredni test ELISA. Bezpośredni test ELISA wykorzystuje tylko pierwotne przeciwciała do wykrywania antygenu, podczas gdy pośredni test ELISA wykorzystuje zarówno pierwotne, jak i wtórne przeciwciała. W bezpośrednim teście ELISA przeciwciała pierwotne są znakowane, podczas gdy w pośrednim teście ELISA znakowane są przeciwciała wtórne. Jest to różnica między bezpośrednim a pośrednim testem ELISA.

Bibliografia
1. „Test immunoenzymatyczny (ELISA).” Biuletyn Światowej Organizacji Zdrowia. U.S. National Library of Medicine, 1976. Web. 29 marca 2017 r
2. Loon, A. M van, J. T Van Der Logt, F. W. Heessen i J. Van Der Veen. „Test immunoenzymatyczny połączony z enzymem, który wykorzystuje znakowany antygen do wykrywania przeciwciał immunoglobulin M i A w toksoplazmozie: porównanie z pośrednią immunofluorescencją i testem immunoenzymatycznym podwójnie kanapkowym”. Journal of Clinical Microbiology. U.S. National Library of Medicine, czerwiec 1983. Web. 29 marca 2017 r

Zdjęcie dzięki uprzejmości:
1. „Diagram ELISA” Autor: Cavitri - Praca własna (CC BY 3.0) za pośrednictwem Commons Wikimedia 
2. „Pośredni test ELISA” Autor: Cawang - Praca własna (CC0) za pośrednictwem Commons Wikimedia