Różnica między ciepłą a zimną trypsynizacją
Share
Kluczowa różnica - Warm vs. Zimno Trypsynizacja
Ciepła i zimna trypsynizacja to dwie metody stosowane w enzymatycznej dezagregacji komórek w hodowli komórek zwierzęcych. The kluczowa różnica między ciepłą a zimną trypsynizacją, jak sugerują nazwy, zależy od temperatury, w której trypsyna jest dodawana do dezagregacji komórkowej. Ciepła trypsynizacja odbywa się w wyższych temperaturach (36,5 - 37 0C) podczas gdy trypsynizacja na zimno odbywa się w warunkach niskiej temperatury.
Podczas procesu pierwotnej hodowli komórek zwierzęcych wykorzystywane są trzy główne metody, które okazały się skuteczne. Trzy metody obejmują mechaniczną dezagregację komórek, enzymatyczną dezagregację komórek i technikę pierwotnego eksplantu. Enzymatyczna dezagregacja komórek prowadząca do izolacji komórek i odbywa się przez enzym degradujący białka trypsynę. Dlatego ten proces jest znany jako trypsynizacja. Trypsynizację można przeprowadzić w dwóch różnych warunkach, mianowicie Trypsynizacji na ciepło i Trypsynizacji na zimno. Ciepła trypsynizacja to metoda traktowania komórek trypsyną w ciepłych warunkach w temperaturze 36,5 - 37 0C. Trypsynizacja na zimno to proces traktowania trypsyną, który odbywa się w chłodniejszych warunkach, najlepiej w lodzie, utrzymując bardzo niskie temperatury.
ZAWARTOŚĆ
1. Przegląd i kluczowa różnica
2. Co to jest ciepła trypsynizacja
3. Co to jest zimna trypsynizacja
4. Podobieństwa między ciepłą a zimną trypsynizacją
5. Porównanie obok siebie - trypsynizacja na ciepło i na zimno w formie tabelarycznej
6. Podsumowanie
Co to jest ciepła trypsynizacja?
Trypsynizację można przeprowadzić w celu dezagregacji składników komórkowych w celu wyizolowania komórek w celu wytworzenia pierwotnej kultury komórkowej. Trypsyna jest enzymem degradującym białka, a mieszaniną enzymów stosowaną w trypsynizacji może być surowy ekstrakt lub oczyszczony produkt. Mówi się, że surowy ekstrakt jest bardziej skuteczny w lizie białek i rozpadach komórek, ponieważ zawiera inne enzymy degradujące.
Ciepła trypsynizacja jest najczęściej stosowaną metodą enzymatyczną do dezagregacji komórek, która odbywa się w wyższych temperaturach. Przed zabiegiem trypsynizacją pożądaną tkankę kroi się na mniejsze kawałki. Ułatwia łatwy proces dezagregacji. Posiekaną tkankę następnie myje się w specjalnym medium znanym jako ośrodek Dissection Basal Salt.
Po zakończeniu etapu płukania komórki transformuje się do kolby zawierającej aktywny enzym, którym jest trypsyna. Ponieważ technika ta implikuje ciepły protokół trypsynizacyjny, trypsynę umieszcza się w temperaturze około 37 ° C 0C przez około cztery godziny.
Rycina 01: Trypsyna
Zawartość miesza się i miesza stosując metody wirowania dla ułatwienia protokołu i przyspieszenia procesu dezagregacji. Po osiągnięciu zalecanego czasu komórki można uzyskać z supernatantu. Komórki pochodzące z supernatantu są następnie inkubowane w określonej temperaturze i czasie.
Co to jest zimna trypsynizacja?
Zimna trypsynizacja to inny rodzaj trypsynizacji, która ma miejsce w niskich temperaturach. W tej technice komórki, które są posiekane i umyte, umieszcza się w fiolkach na lodzie, a następnie nasącza trypsyną. Okres moczenia jest znacznie dłuższy - około 6 - 24 godzin.
Po zakończeniu procedury namaczania trypsynę usuwa się z lizatu komórkowego, a kawałki tkanek dalej inkubuje się w 37 ° C 0C przez około 20-30 minut. Dezagregacja komórek jest spowodowana przez wielokrotne pipetowanie mieszaniny tkanek. Pozwoli to komórkom oddzielić się od błony i dojść do supernatantu. Gdy komórki znajdą się w supernatancie, są one inkubowane i hodowane w pożądanej temperaturze i okresie czasu.
Metoda trypsynizacji na zimno ma kilka zalet
- Wyższa wydajność żywych komórek, ponieważ uszkodzenie komórek jest zminimalizowane. Uszkodzenie komórki jest zminimalizowane przez niestosowanie etapów wirowania.
- Bardzo wygodna metoda.
- Mniej pracochłonne.
Głównym ograniczeniem metody trypsynizacji na zimno jest to, że dużych ilości nie można użyć w jednym przypadku.
Jakie są podobieństwa między ciepłą a zimną trypsynizacją?
- W procesach trypsynizacji zarówno ciepłej, jak i zimnej wykorzystuje się enzym trypsynę do dezagregacji komórek.
- Zarówno trypsynizację na ciepło, jak i na zimno stosuje się w procedurach hodowli komórkowej do dezagregacji komórek.
- W procedurach leczenia trypsynizacją na ciepło i na zimno komórki pochodzą z supernatantu.
Jaka jest różnica między ciepłą a zimną trypsynizacją?
Trypsynizacja na ciepło i na zimno | |
| Ciepła trypsynizacja to metoda traktowania komórek trypsyną w ciepłych warunkach w temperaturze 36,5 - 37 0. | Trypsynizacja na zimno jest procesem traktowania trypsyną, który odbywa się w chłodniejszych warunkach, najlepiej w lodzie, utrzymując bardzo niskie temperatury. |
| Protokół | |
| Posiekane kawałki tkanki są utrzymywane na poziomie 37 0C przez cały czas procedury. | Porąbane fragmenty tkanki są początkowo utrzymywane w niskich temperaturach, a następnie utrzymywane na poziomie 37 0. |
| Temperatura | |
| Ciepła trypsynizacja występuje przy 36,5 - 37 0 | Zimna trypsynizacja zachodzi w niskich temperaturach. |
| Pochłonięty czas | |
| Krótszy czas potrzebny na cały proces (około 4 godzin) ciepłej trypsynizacji. | Wymagany jest dłuższy czas (około 6–24 godzin) na zimną trypsynizację. |
| Wydajność żywotnych komórek | |
| Niska zawartość ciepłej trypsynizacji. | Bogaty w zimną trypsynizację. |
| Zastosowanie wirowania | |
| Wirowanie jest wymagane do dezagregacji komórek w ciepłej trypsynizacji. | Wirowanie nie jest wymagane w zimnej trypsynizacji. |
| Początkowa ilość tkanek do trypsynizacji | |
| Większą ilość tkanki można wykorzystać do ciepłej trypsynizacji. | Mniejsza ilość tkanki może być użyta do zimnej trypsynizacji. |
| Uszkodzenie komórki | |
| Wysoka z powodu odwirowania w ciepłej trypsynizacji. | Mniej z powodu zimnej trypsynizacji. |
streszczenie - Warm vs Zimno Trypsynizacja
Trypsynizacja to metoda wykorzystująca enzym degradujący białka trypsynę do dezagregacji i przygotowania pierwotnych kultur komórkowych podczas procesu hodowli komórkowej. Istnieją dwie główne techniki trypsynizacji oparte na temperaturach stosowanych podczas zabiegu. Są ciepłą i zimną trypsynizacją. Ciepłą trypsynizację przeprowadza się w 37 0C mając na uwadze, że trypsynizację na zimno przeprowadza się w warunkach lodowatych. Chociaż zimna trypsynizacja zajmuje więcej czasu, mówi się, że ma wyższą wydajność żywych komórek. Wynika to z faktu, że uszkodzenie komórek jest minimalizowane podczas zimnej trypsynizacji, ponieważ nie stosuje energicznych etapów wirowania. Na tym polega różnica między ciepłą a zimną trypsynizacją.
Odniesienie:
1. „Trypsynizacja”. Trypsynizacja - przegląd | Tematy ScienceDirect. Dostępny tutaj
2. „Podstawowa hodowla komórkowa: 3 techniki (z diagramem).” Dyskusja na temat biologii, 16 października 2015 r. Dostępne tutaj
Zdjęcie dzięki uprzejmości:
1.'Trypsin active site 'Przez Fdardel - Praca własna (CC BY-SA 3.0) przez Commons Wikimedia
