Różnica między SDS Page a Western Blot

Kluczowa różnica - strona SDS kontra Western Blot
 

Western blotting to technika, która wykrywa określone białko z próbki białka. Technikę tę wykonuje się w kilku kluczowych etapach: elektroforeza żelowa, blotting i hybrydyzacja. Elektroforeza w żelu poliakryloamidowym z dodecylosiarczanem sodu (SDS Page) jest rodzajem techniki elektroforezy żelowej, która służy do oddzielania białek według ich wielkości (masy cząsteczkowej). Western blot to specjalny arkusz błony bibułkowej, który służy do przenoszenia tego samego wzoru białek na stronie SDS. Kluczowa różnica między SDS Page a western blot polega na tym Strona SDS umożliwia rozdział białek w mieszaninie podczas western blot umożliwia wykrycie i oznaczenie ilościowe konkretnego białka z mieszaniny. Oba są przydatne w badaniach analizy białek.

ZAWARTOŚĆ
1. Przegląd i kluczowa różnica
2. Co to jest strona SDS
3. Co to jest Western Blot
4. Porównanie obok siebie - SDS Page vs. Western Blot
5. Podsumowanie

Co to jest strona SDS?

Strona SDS jest techniką elektroforezy żelowej stosowaną do rozdziału białek. Jest powszechnie stosowany w biochemii, genetyce, medycynie sądowej i biologii molekularnej. Po wyekstrahowaniu białek z próbki są one poddawane działaniu żelu złożonego z SDS i poliakryloamidu. SDS jest anionowym detergentem stosowanym do linearyzacji białek (denaturowanych białek) i do nadawania ujemnego ładunku linearyzowanym białkom proporcjonalnie do ich masy cząsteczkowej. Poliakryloamid staje się stałym nośnikiem żelu. Denaturowane białka, które są naładowane ujemnie, migrują w kierunku dodatniego końca aparatu przez żel. W zależności od wielkości białek prędkości migracji różnią się między białkami i następuje separacja. Dlatego strona SDS jest przydatna do rozdzielania poszczególnych białek na podstawie ich wielkości.

Przygotowanie żelu poliakryloamidowego do frakcjonowania białek jest kluczowym krokiem na stronie SDS. Prawidłowe stężenie poliakryloamidu i rodzaj zastosowanego środka sieciującego silnie wpływają na właściwości fizyczne żelu, co powoduje faktyczne rozdzielenie różnych białek. Rozmiary porów żelu powinny być odpowiednio zarządzane w celu skutecznego oddzielenia. Jednak SDS Page uważa się za technikę rozdzielania białek o wysokiej rozdzielczości.

Technika SDS Page ma główne ograniczenie w analizie białek. Ponieważ SDS denaturuje białka przed rozdziałem, nie pozwala na wykrycie aktywności enzymatycznej, interakcji wiążących białka, kofaktorów białka itp..

Rysunek 01: Strona SDS

Co to jest Western Blot?

Technika Western blot umożliwia wykrycie określonego białka z mieszaniny białek oraz pomiar ilości i masy cząsteczkowej białka. Western blot jest membraną stosowaną podczas procedury blottingowej, aby uzyskać lustrzane odbicie wzorów białkowych w żelu SDS-poliakryloamidowym. Membrana stosowana do western-blot składa się głównie z nitrocelulozy lub difluorku poliwinylidenu (PVDF). Błona z przeniesionym białkiem może być użyta do identyfikacji pożądanego białka. Wymaga wysokiej jakości przeciwciała do wykrywania pożądanego białka przez hybrydyzację. Przeciwciało wiąże się ze swoistym antygenem i ujawnia obecność pożądanego antygenu, który jest białkiem.

Przenoszenie białek z żelu poliakryloamidowego SDS do western blot przeprowadza się przez elektroblotting. Jest to skuteczna i szybka metoda, która powoduje elektroforezę białek z żelu i przejście na błonę nitrocelulozową (western blot).

Rysunek 02: Western Blot

Jaka jest różnica między SDS Page a Western Blot?

Strona SDS kontra Western Blot
Strona SDS jest techniką elektroforezy żelowej.	Western blot to technika wykonywana na błonie w celu wykrycia określonego białka z mieszaniny.
Posługiwać się
Strona SDS pozwala na separację białek według ich wielkości.	Western blot pozwala na przenoszenie białek na żelu strony SDS bez zmiany jego wzoru i umożliwia hybrydyzację ze specyficznymi przeciwciałami.
Niedogodności
Denaturacja białek, wysokie koszty i obecność chemikaliów neurotoksyny to wady tej techniki.	Ta technika jest czasochłonna i wymaga dobrze doświadczonych osobistych i ściśle kontrolowanych warunków.

Podsumowanie - SDS Page vs Western Blot

Strona SDS i Western blot to dwie metody analizy białek. Strona SDS umożliwia łatwe rozdzielenie białek na żelu zgodnie z ich masą cząsteczkową. Western blot pomaga potwierdzić obecność i ilość specyficznego białka poprzez hybrydyzację ze specyficznymi przeciwciałami. Jest to różnica między SDS Page a western blot.

Bibliografia:
1. Blancher, C. i A. Jones. „SDS-PAGE i techniki Western Blotting.” Metody w medycynie molekularnej. U.S. National Library of Medicine, n.d. Sieć. 27 marca 2017 r
2. Nowakowski, Andrew B., William J. Wobig i David H. Petering. „Natywna SDS-PAGE: elektroforetyczne rozdzielanie białek w wysokiej rozdzielczości z zachowaniem właściwości macierzystych, w tym związanych jonów metali.” Metalomika: zintegrowana nauka biometryczna. U.S. National Library of Medicine, maj 2014. Internet. 27 marca 2017 r.

Zdjęcie dzięki uprzejmości:
1. „Elektroforeza SDS-PAGE” autor Bensaccount z angielskiej Wikipedii (CC BY 3.0) przez Commons Wikimedia
2. „Western blot 114A” Autor: Amanthabagdon - Praca własna (domena publiczna) za pośrednictwem Commons Wikimedia