Różnica między RP HPLC i HIC

The kluczowa różnica między RP HPLC i HIC jest to RP HPLC wykorzystuje bardziej polarną fazę ruchomą i mniej polarną fazę stacjonarną. Natomiast HIC wykorzystuje hydrofobową fazę stacjonarną, która umożliwia przyłączenie się do niej hydrofobowych cząsteczek.

Chromatografia to technika analityczna, która pomaga rozdzielić mieszaninę na jej składniki. Najpierw musimy rozpuścić próbkę, która ma zostać podzielona na roztwór. Ta mieszanina roztwór-substancja nazywa się fazą ruchomą. Następnie faza ruchoma przechodzi przez inny materiał zwany fazą stacjonarną. Faza stacjonarna determinuje rozdział składników. Rozdzielanie następuje z powodu podziału materiału między fazą ruchomą a fazą stacjonarną.

ZAWARTOŚĆ

1. Przegląd i kluczowa różnica
2. Co to jest RP HPLC
3. Co to jest HIC
4. Porównanie obok siebie - RP HPLC vs. HIC w formie tabelarycznej
5. Podsumowanie

Co to jest RP HPLC?

Termin RP HPLC oznacza Wysokosprawna chromatografia cieczowa z odwróconymi fazami. Polega na rozdzieleniu składników w mieszaninie, zgodnie z hydrofobowością. Składniki hydrofobowe w fazie ruchomej łączą się z unieruchomionymi ligandami hydrofobowymi w fazie stacjonarnej, podczas gdy składniki hydrofilowe eluują przez fazę stacjonarną bez przyłączania się do powierzchni fazy stacjonarnej.

Rycina 01: Aparat HPLC

Ponadto metoda ta ma większą odtwarzalność w porównaniu z innymi technikami chromatograficznymi i wykazuje również szerokie zastosowanie. Dlatego używamy tej metody w laboratoriach dla ponad 75% wszystkich metod HPLC. Przez większość czasu jako fazę ruchomą używamy wodnej mieszanki wody ze mieszalnym polarnym rozpuszczalnikiem organicznym. W ten sposób zapewni przyczepienie składników hydrofobowych w roztworze do powierzchni fazy stacjonarnej.

Co to jest HIC?

Termin HIC oznacza Chromatografia oddziaływań hydrofobowych. Jest to rodzaj HPLC z odwróconymi fazami i ta metoda jest stosowana głównie do oddzielania dużych biocząsteczek, takich jak białka. W tej metodzie musimy użyć ośrodka wodnego, aby przygotować próbkę biomolekuły. Jest tak, ponieważ rozpuszczalniki organiczne mogą powodować denaturację białek. Ponadto w tej technice wykorzystuje się interakcję między dużymi cząsteczkami z lekko hydrofobową powierzchnią fazy stacjonarnej. Ponadto musimy zastosować wysokie stężenie soli w próbce, ponieważ zachęca to białko do zatrzymania na opakowaniu; proces ten nazywa się wysalaniem. Stopniowo zmniejszając stężenie soli, możemy sprawić, że biomolekuły będą eluować osobno zgodnie z ich hydrofobowością.

Zwykle w tej metodzie stosuje się warunki przeciwne do chromatografii jonowymiennej. W tej technice najpierw musimy przepuścić roztwór buforowy przez kolumnę, aby zmniejszyć solwatację substancji rozpuszczonej w próbce. To powoduje, że hydrofobowe regiony białka eksponują się. Jednak gdy cząsteczka jest bardziej hydrofobowa, potrzeba mniej soli, aby promować wiązanie. Tutaj, mniej hydrofobowe substancje rozpuszczone są najpierw eluowane, a zgodnie ze zmianą stężenia soli, bardziej hydrofobowe substancje rozpuszczane są eluowane jako ostatnie.

Jaka jest różnica między RP HPLC a HIC?

Chromatografia to technika analityczna do oddzielania składników w mieszaninie. RP HPLC i HIC to dwie wyspecjalizowane techniki chromatograficzne. Kluczowa różnica między RP HPLC a HIC polega na tym, że RP HPLC wykorzystuje bardziej polarną fazę ruchomą i mniej polarną fazę stacjonarną, podczas gdy HIC wykorzystuje hydrofobową fazę stacjonarną, która umożliwia przyłączenie się do niej hydrofobowych cząsteczek.

Poniższa infografika podsumowuje różnicę między RP HPLC a HIC.

Podsumowanie - RP HPLC vs. HIC

Odniesienie:

1. „Tryby separacji HPLC”. Wody, dostępne tutaj.

Zdjęcie dzięki uprzejmości:

1. „Preparatywna HPLC” GYassineMrabetTalk & # x2709; Ten obraz wektorowy nieokreślony w W3C został stworzony za pomocą Inkscape. - Praca własna (CC BY 3.0) za pośrednictwem Commons Wikimedia

Nauka i natura