Różnica między odwróconą fazą a normalną HPLC

The kluczowa różnica między HPLC z fazą odwróconą a fazą normalną jest to, że HPLC z odwróconymi fazami wykorzystuje polarną fazę stacjonarną i mniej polarną fazę ruchomą, podczas gdy HPLC z fazą normalną wykorzystuje niepolarną fazę stacjonarną i polarną fazę ruchomą.

HPLC w fazie normalnej jest najstarszą techniką HPLC, którą Tswett zastosował do oddzielania ekstraktów roślinnych; używał kredy w szklanej kolumnie. Był to klasyczny tryb chromatografii, który doprowadził do nazwania go „techniką” normalną. Z drugiej strony HPLC w fazie odwróconej jest przeciwieństwem normalnej techniki, którą naukowcy opracowali ostatnio.

ZAWARTOŚĆ

1. Przegląd i kluczowa różnica
2. Co to jest HPLC z odwróconymi fazami
3. Co to jest HPLC w fazie normalnej
4. Porównanie obok siebie - HPLC z fazą odwróconą w porównaniu z fazą normalną w formie tabelarycznej
5. Podsumowanie

Co to jest HPLC z odwróconymi fazami?

HPLC z odwróconymi fazami jest techniką chromatograficzną, w której stosujemy hydrofobową fazę stacjonarną. Spośród wszystkich metod HPLC stosujemy tę metodę w około 70% z uwagi na jej szerokie zastosowanie i powtarzalność. Faza stacjonarna jest niepolarna, a faza ruchoma jest polarna.

W większości przypadków naukowcy stosują wodną mieszankę wody z mieszalnym polarnym rozpuszczalnikiem organicznym, takim jak acetonitryl lub metanol, jako fazą ruchomą. Dlatego anality oddziałują z niepolarną fazą stacjonarną.

Co to jest HPLC w fazie normalnej?

HPLC w fazie normalnej to technika chromatograficzna, w której stosujemy hydrofilową fazę stacjonarną. Jest to tradycyjna metoda HPLC, choć nie używamy jej zbyt często. Faza stacjonarna jest biegunowa, a faza ruchoma jest niepolarna. Co ważniejsze, faza ruchoma tej techniki jest w 100% organiczna. Oznacza to, że do tego nie jest używana woda.

Rycina 01: Profil próbki dla chromatogramów HPLC w fazie normalnej i w fazie odwróconej zgodnie z biegunowością składników w analicie.

Zazwyczaj faza stacjonarna zawiera krzemionkę, cyjano, diol, fazy związane z aminami itp. Fazy ruchome obejmują rozpuszczalniki organiczne, takie jak heksan, octan etylu itp. Technika ta opiera się na zatrzymywaniu cząsteczek rozpuszczalnika lub analitu na polarnej fazie stacjonarnej.

Jaka jest różnica między HPLC z fazą odwróconą a normalną?

HPLC z odwróconymi fazami jest techniką chromatograficzną, w której stosujemy hydrofobową fazę stacjonarną. Faza stacjonarna tej techniki jest niepolarna. Faza stacjonarna jest niepolarna, podczas gdy faza ruchoma jest biegunowa. Ponadto naukowcy stosują wodną mieszankę wody z mieszalnym polarnym rozpuszczalnikiem organicznym, takim jak acetonitryl lub metanol, jako fazą ruchomą w HPLC z odwróconymi fazami. Natomiast HPLC w fazie normalnej jest techniką chromatograficzną, w której stosujemy hydrofilową fazę stacjonarną. Faza stacjonarna tej techniki jest biegunowa. Faza stacjonarna jest biegunowa, a faza ruchoma niepolarna. Ponadto naukowcy wykorzystują rozpuszczalniki organiczne, takie jak heksan, octan etylu itp., Jako fazę ruchomą HPLC w fazie normalnej. Poniższa infografika przedstawia różnicę między HPLC z fazą odwróconą a fazą normalną w formie tabeli.

Podsumowanie - HPLC w fazie odwróconej w porównaniu z fazą normalną

Techniki HPLC w fazie odwróconej i w fazie normalnej to dwie techniki chromatografii cieczowej. Różnica między HPLC z fazą odwróconą i z fazą normalną polega na tym, że HPLC z fazą odwróconą wykorzystuje fazę stacjonarną polarną i mniej polarną fazę ruchomą, podczas gdy HPLC fazy normalnej wykorzystuje niepolarną fazę stacjonarną i polarną fazę ruchomą.

Odniesienie:

1. Wody. „Tryby separacji HPLC”. HPLC - Wyjaśnienie wysokosprawnej chromatografii cieczowej: Wody. Dostępny tutaj