Różnica między hybrydyzacją in situ a immunohistochemią

Kluczowa różnica - hybrydyzacja in situ vs. immunohistochemia
 

Diagnostyka raka i chorób zakaźnych jest popularnym trendem, w którym wykorzystuje się nowe techniki oparte na proteomice i genomice w celu identyfikacji nowotworów lub komórek zakaźnych, ich proliferacji i miejsc rozwoju komórek oraz analizy genetycznych podstaw większości chorób zakaźnych i niezakaźnych. Zaowocuje to dokładnym przetwarzaniem i projektowaniem leków oraz opracowywaniem niestandardowych terapii chorób. Hybrydyzacja in situ (ISH) i immunohistochemia (IHC) to dwie tak szeroko stosowane techniki w biologii raka, a kluczowa różnica między hybrydyzacją in situ a immunochemią polega na cząsteczkach stosowanych w procedurze analizy. W ISH do analiz stosuje się sondy kwasu nukleinowego, natomiast w IHC do oznaczeń diagnostycznych stosuje się przeciwciała monoklonalne i poliklonalne.

ZAWARTOŚĆ

1. Przegląd i kluczowa różnica
2. Co to jest hybrydyzacja in situ
3. Co to jest immunohistochemia
4. Podobieństwa między hybrydyzacją in situ a immunohistochemią
5. Porównanie obok siebie - hybrydyzacja in situ vs immunohistochemia w formie tabelarycznej
6. Podsumowanie

Co to jest hybrydyzacja in situ (ISH)?

Hybrydyzacja in situ jest techniką hybrydyzacji kwasu nukleinowego, która jest wykonywana bezpośrednio na części lub odcinku tkanki, w całej tkance lub w komórkach. Technika zależy od teorii komplementarnego parowania zasad Watsona Cricka, co skutkuje hybrydami DNA-DNA lub hybrydami DNA-RNA, które mogą wykrywać zmutowane geny lub zidentyfikować wymagany gen będący przedmiotem zainteresowania. Jednoniciowe sekwencje DNA, dwuniciowe sekwencje DNA, jednoniciowe sekwencje RNA lub syntetyczne sekwencje oligonukleotydowe są stosowane jako sondy podczas techniki hybrydyzacji, a sondy te są znakowane radioaktywnym fosforem na jego końcu 5 'do procedur identyfikacyjnych po autoradiografii lub znakowane przy użyciu barwników fluorescencyjnych . Dostępne są różne rodzaje technik ISH w zależności od rodzaju zastosowanej sondy i rodzaju zastosowanej techniki wizualizacji.

Rycina 01: Hybrydyzacja fluorescencyjna in situ

Istnieje wiele zastosowań ISH, głównie w diagnostyce molekularnej chorób zakaźnych w celu identyfikacji obecności patogenów i potwierdzenia patogenu za pomocą diagnostyki molekularnej. Jest również stosowany w dziedzinie biologii rozwoju, kariotypowania i analizy filogenetycznej oraz mapowania fizycznego chromosomów.

Co to jest immunohistochemia (IHC)?

W technice IHC główną analizowaną cząsteczką jest antygen. Podczas IHC stosuje się przeciwciała monoklonalne i poliklonalne w celu określenia obecności antygenów po zakażeniu lub statusie proliferacji komórek złośliwych. Technika ta opiera się na wiązaniu antygen-przeciwciało i do tej techniki stosuje się znaczniki enzymatyczne; jednym z takich zastosowań jest ELISA (test immunoenzymatyczny połączony z enzymem). Markery mogą być także przeciwciałami znakowanymi fluorescencyjnie lub przeciwciałami znakowanymi radiowo.

Rycina 02: Immunohistochemia

IHC jest szeroko stosowany do wykrywania komórek rakowych. Procedury diagnostyczne ukierunkowane są na antygeny obecne w komórkach nowotworowych w celu zidentyfikowania i scharakteryzowania guza. Ta sama procedura została zastosowana w celu zdiagnozowania czynników zakaźnych. Przeciwciała monoklonalne i poliklonalne są również wykorzystywane do analizy różnych produktów genów, umożliwiając reakcję wiązania przeciwciało-antygen między pożądanym białkiem a podawanym syntetycznym przeciwciałem.

Jakie są podobieństwa między hybrydyzacją in situ a immunohistochemią?

• ISH i IHC są wysoce specyficznymi reakcjami.
• Obie techniki są bardzo dokładne.
• Obie techniki mogą być stosowane w diagnostyce raka i chorób zakaźnych.
• Te techniki są wykonywane w sterylnych warunkach in-vitro.
• Obie są szybkimi technikami, które zapewniają powtarzalne wyniki.
• ISH i IHC stosują metody wykrywania, takie jak znakowanie radiowe i techniki fluorescencyjne.

Jaka jest różnica między hybrydyzacją in situ a immunohistochemią?

Hybrydyzacja in situ a immunohistochemia
ISH jest techniką hybrydyzacji kwasu nukleinowego, która jest wykonywana bezpośrednio na części lub odcinku tkanki lub na całej tkance.	IHC to technika, w której przeciwciała monoklonalne i poliklonalne są wykorzystywane do określania obecności antygenów, które są specjalnymi markerami białkowymi umieszczonymi na powierzchniach komórek.
Rodzaj analizowanych biocząsteczek
ISH analizuje kwasy nukleinowe.	IHC analizuje białka-antygeny.
Podstawa reakcji biochemicznej
W tej technice występuje komplementarne parowanie zasad między DNA-DNA lub DNA-RNA.	Interakcje antygen-przeciwciało biorą udział w immunohistochemii.
Metody wykrywania związane z enzymem
Metody wykrywania związane z enzymem nie mogą być stosowane w ISH.	Metody wykrywania związane z enzymem można stosować w IHC.

Podsumowanie - hybrydyzacja in situ a immunohistochemia

Diagnostyka molekularna to szybkie i potwierdzające metody, które można zastosować do identyfikacji choroby niezakaźnej, takiej jak rak lub choroba zakaźna, takiej jak HIV lub gruźlica, w oparciu o markery molekularne obecne w komórkach, które prowadzą do manifestacji choroby. Markery molekularne mogą być obecne w postaci białek ulegających ekspresji lub na poziomie genetycznym, na podstawie których wprowadza się różne nowe techniki w celu zwiększenia wydajności i są mniej pracochłonne, chociaż z tymi technikami wiąże się wysoki koszt. Zatem ISH zależy od tworzenia hybrydy DNA-DNA lub DNA-RNA, a IHC zależy od specyficznych reakcji między przeciwciałem a antygenem. Jest to różnica między hybrydyzacją in situ.

Pobierz wersję PDF hybrydyzacji in situ vs immunohistochemia

Możesz pobrać wersję PDF tego artykułu i używać go do celów offline zgodnie z cytatem. Pobierz wersję PDF tutaj Różnica między hybrydyzacją in situ a immunohistochemią.

Bibliografia:

1. Duraiyan, Jeyapradha, i in. „Zastosowania immunohistochemii”. Journal of Pharmacy & Bioallied Sciences, Medknow Publications & Media Pvt Ltd, sierpień 2012, dostępny tutaj. Dostęp 24 sierpnia 2017 r.
2. „Hybrydyzacja in situ (ISH)”. National Center for Biotechnology Information, U.S. National Library of Medicine, dostępne tutaj. Dostęp 24 sierpnia 2017 r.

Zdjęcie dzięki uprzejmości:

1. „FISH (Fluorescent In Situ Hybridization)” autor MrMatze - Praca własna (CC BY-SA 3.0) przez Commons Wikimedia
2. „Immunohistochemicalstaining2” Autor: Imoen z angielskojęzycznej Wikipedii (CC BY-SA 3.0) przez Commons Wikimedia