Różnica między barwieniem Grama a kwasem szybko

Kluczowa różnica - barwienie metodą Grama vs Acid Fast
 

Bakterie to bardzo małe mikroorganizmy. Są przezroczyste, a ich wykrycie jest trudne w warunkach życia i braku poplamienia. Dlatego opracowano różne metody barwienia w celu ułatwienia wykrywania bakterii. Istnieją trzy główne rodzaje technik barwienia: proste barwienie, barwienie różnicowe i barwienie strukturalne. Barwienie różnicowe to technika wykorzystująca więcej niż jedną plamę do różnicowania bakterii. Barwienie metodą Grama i barwienie odporne na działanie kwasów jest najbardziej znane jako zabarwienie różnicowe. Barwienie metodą Grama jest różnicową techniką barwienia, która dzieli bakterie na dwie grupy znane jako bakterie Gram-dodatnie i bakterie Gram-ujemne. Barwnik kwasoodporny to barwnik różnicowy stosowany do identyfikacji organizmów odpornych na kwas, takich jak Mycobacterium z organizmów szybkoschnących. Jest to kluczowa różnica między barwieniem Grama a barwieniem Acid Fast.

ZAWARTOŚĆ

1. Przegląd i kluczowa różnica
2. Co to jest plama Gram 
3. Co to jest Acid Fast
4. Podobieństwa między barwieniem Grama a kwasem szybko
5. Porównanie obok siebie - barwienie metodą Grama vs. kwasowanie szybkie w formie tabelarycznej
6. Podsumowanie

Co to jest Gram Stain?

Barwienie metodą Grama jest ważną techniką barwienia różnicowego stosowaną do identyfikacji bakterii w mikrobiologii. Technikę tę wprowadził duński bakteriolog Hans Christian Gram w 1884 r. Barwienie metodą Grama dzieli bakterie na dwie główne grupy o nazwie gram dodatniej i gram ujemnej, które są bardzo ważne w klasyfikacji i identyfikacji bakterii. Mikrobiologowie wykonują barwienie gramów jako wstępny etap charakteryzacji bakterii podczas swoich badań.

Bakterie są pogrupowane na podstawie różnic w ich ścianie komórkowej. Bakterie Gram-dodatnie składają się z grubej warstwy peptydoglikanu w ścianie komórkowej, podczas gdy bakterie Gram-ujemne składają się z cienkiej warstwy peptydoglikanu w ścianie komórkowej. Wynik barwienia w gramach będzie oparty na różnicy grubości warstwy peptydoglikanu w ścianie komórkowej.

Barwienie w gramach przeprowadza się przy użyciu czterech różnych odczynników, a mianowicie; bejca pierwotna, zaprawa, środek odbarwiający i przebarwienie. Fiolet krystaliczny i safranin stosuje się odpowiednio jako barwniki podstawowe i przeciwbarwne, podczas gdy gram jodu i 95% alkoholu stosuje się odpowiednio jako zaprawę i dekolourizer. Podstawowe etapy barwienia w gramach są następujące;

1. Na czystym szklanym szkiełku przygotowuje się rozmaz bakteryjny, utrwala na gorąco i chłodzi.
2. Rozmaz zalewany jest fioletem krystalicznym przez 1-2 minuty.
3. Rozmaz spłukuje się wolno działającą wodą z kranu, aby usunąć nadmiar plam.
4. Jod w gramach nakłada się na rozmaz przez 1 minutę.
5. Rozmaz spłukuje się wolno działającą wodą wodociągową
6. Rozmaz przemywa się 95% alkoholem przez 2 - 5 sekund i spłukuje wolno działającą wodą wodociągową.
7. Rozmaz wybarwiany jest safraniną przez 1 minutę
8. Rozmaz spłukuje się wolno działającą wodą wodociągową, suszy i obserwuje pod mikroskopem.

Pod koniec barwienia w gramach bakterie Gram-ujemne będą obserwowane w kolorze różowym, a bakterie gram-dodatnie w kolorze fioletowym.

Rycina 01: Bakterie Gram-ujemne i Gram-dodatnie

Wynik barwienia w gramach zależy od grubości warstwy peptydoglikanu w ścianie komórkowej. Podczas etapu odbarwiania pierwotną plamę i zaprawę można łatwo usunąć z bakterii gramujemnych i stają się bezbarwne, ponieważ mają cienką warstwę peptydoglikanu. Pierwotne zabarwienie zatrzymuje się w bakteriach gram dodatnich, ponieważ mają one grubą warstwę peptydoglikanu. Przeciwbarwienie nie będzie skuteczne w przypadku bakterii Gram-dodatnich z powodu zatrzymania pierwotnego zabarwienia. Tak więc bakterie Gram-dodatnie będą widoczne w pierwotnym kolorze plamy, to znaczy w kolorze fioletowym. Przeciwbarwienie zabarwi bakterie Gram-ujemne i będą one widoczne w wybranym kolorze, który jest kolorem safraniny. W związku z tym łatwo jest podzielić bakterie na dwie grupy według barwienia metodą Grama i jest cenny w różnicowaniu i identyfikacji bakterii.

Co to jest Acid Fast?

Odporność na kwasy to właściwość fizyczna niektórych bakterii, a zwłaszcza ich odporność na odbarwianie przez kwasy podczas procedur barwienia. Po zabarwieniu organizmy te są odporne na rozcieńczone kwasy i / lub etanol procedury odbarwiania, typowe dla wielu protokołów barwienia. Dlatego te organizmy nadano nazwę „szybko kwasowy”. Ta właściwość jest pokazana ze względu na wysoki poziom woskowego materiału (kwasów mikolowych) w ścianach komórkowych. Ten test ma kluczowe znaczenie dla identyfikacji Prątek gruźlicy.

Ryc. 2: Mykobakterie szybko kwasowe

Ta kwasoodporna plama została opracowana przez Paula Ehrlicha w 1882 roku. Technikę szybkiego kwasu Ehrlich zmodyfikowano przez Ziehla-Neelsena i jest ona obecnie stosowana częściej. Procedura szybkiego barwienia kwasem obejmuje trzy różne odczynniki. Carbol fuschin stosuje się jako pierwotną plamę. Kwaśny alkohol jest stosowany jako środek odbarwiający. Błękit metylenowy stosuje się jako barwnik kontrastowy. Procedura barwienia przeprowadzana jest w następujący sposób.

1. Pierwotne zabarwienie (karbol fuksyna) nakłada się na utrwaloną próbkę na szkiełku (wszystkie komórki zostaną zabarwione na czerwono).
2. Szkiełko jest ogrzewane przez gotowanie na parze przez 5 minut, co powoduje właściwe wbicie plam do komórek.
3. Następnie dodaje się roztwór odbarwiający (usuwa czerwony barwnik ze wszystkich komórek oprócz bakterii szybko kwasowych).
4. Błękit metylenowy jest dodawany jako przeciwbarwienie (zabarwia wszystkie odbarwione komórki bakteryjne).
5. Bakterie szybko kwasowe pozostają czerwone, podczas gdy bakterie bezkwasowe zabarwiają się na niebiesko.

Jakie są podobieństwa między barwnikiem Gram a kwasem Fast?

• Barwienie metodą Grama i kwasowanie szybkie to dwie techniki barwienia różnicowego.
• Obie techniki dzielą bakterie na dwie grupy.
• Obie techniki wykorzystują dwie plamy i jedną odbarwiającą.

Jaka jest różnica między barwieniem Grama a kwasem Fast?

Plama Grama vs Acid Fast
Barwienie metodą Grama jest różnicową techniką barwienia, która dzieli bakterie na dwie grupy bakterie Gram-dodatnie i bakterie Gram-ujemne.	Barwienie Acid Fast jest barwnikiem różnicowym stosowanym do identyfikacji organizmów odpornych na kwas z organizmów szybko kwasowych.
Pierwotna plama
Fiolet krystaliczny jest powszechnie stosowanym pierwotnym barwnikiem w barwieniu gramowym.	Carbol fuchsin jest pierwotną plamą stosowaną w kwasie szybko.
Środek odbarwiający
95% alkoholu stosuje się jako środek odbarwiający w barwieniu gramowym.	Kwaśny alkohol stosuje się jako środek odbarwiający w kwasie szybko.
Counter Stain
Barwienie metodą Grama wykorzystuje safraninę jako zabarwienie kontrastowe.	Barwienie szybkie kwasem wykorzystuje błękit metylenowy jako zabarwienie przeciwne.
Obserwacja
Bakterie Gram-ujemne są obserwowane w kolorze wybarwienia, a bakterie gram-dodatnie w kolorze fioletowym.	Bakterie Fast Fast są obserwowane w kolorze czerwonym, a bakterie kwasowe Fast są obserwowane w kolorze niebieskim.

Podsumowanie - Gram Stain vs Acid Fast

Wizualizacja mikroorganizmów w stanie żywym jest trudna. Dlatego barwienia biologiczne i procedury barwienia są szeroko stosowane w celu zbadania ich właściwości. Barwienie różnicowe jest jednym z rodzajów technik barwienia stosowanych do różnicowania bakterii. Barwienie metodą Grama i szybkie barwienie kwasem to dwie techniki barwienia różnicowego. Barwienie metodą Grama różnicuje bakterie Gram-ujemne i Gram-dodatnie w zależności od grubości ich ścian komórkowych. Szybkie barwienie kwasem odróżnia bakterie szybko kwasowe od bakterii bezkwasowych na podstawie zawartości kwasu mikolowego w ścianie komórkowej. Jest to różnica między bejcowaniem kwasowym a gramowym.

Pobierz wersję PDF Gram Stain vs Acid Fast

Możesz pobrać wersję PDF tego artykułu i używać go do celów offline zgodnie z cytatem. Pobierz wersję PDF tutaj Różnica między barwnikiem Gram a kwasem szybkim.

Bibliografia:

1. Aryal, Sagar. „Barwienie kwasoodporne - zasada, procedura, interpretacja i przykłady.” Internetowe uwagi mikrobiologiczne. N.p., 08 maja 2017 r. Internet. Dostępny tutaj. 20 lipca 2017 r.
2. Barwniki różnicowe do identyfikacji bakterii: Gram, szybko-kwasowo i endospor. N.p., n.d. Sieć. Dostępny tutaj. 20 lipca 2017 r.

Zdjęcie dzięki uprzejmości:

1. „Węzeł chłonny - nietypowe zakażenie prątkami (MAI) - przebarwienie AFB” autorstwa Yali Rosen (CC BY-SA 2.0) za pośrednictwem Flickr
2. „Gram stain 01” By Y tambe - plik Y tambe (CC BY-SA 3.0) przez Commons Wikimedia