Różnica między elektroforezą żelową a stroną SDS

Kluczowa różnica - elektroforeza żelowa vs. SDS Page
 

Elektroforeza żelowa to technika, która oddziela makrocząsteczki w polu elektrycznym. Jest to powszechna metoda w biologii molekularnej do oddzielania DNA, RNA i białek od mieszanin zgodnie z ich wielkością cząsteczkową. Strona SDS jest rodzajem elektroforezy żelowej, która jest stosowana do oddzielania białek od mieszaniny białek na podstawie ich wielkości. Elektroforeza żelowa jest terminem stosowanym w odniesieniu do normalnej techniki stosowanej do separacji DNA, RNA i białka podczas Strona SDS jest jednym z rodzajów elektroforezy żelowej. Jest to kluczowa różnica między elektroforezą żelową a SDS Page.

ZAWARTOŚĆ
1. Przegląd i kluczowa różnica
2. Co to jest elektroforeza żelowa
3. Co to jest strona SDS
4. Porównanie obok siebie - elektroforeza żelowa vs. SDS Page
5. Podsumowanie

Co to jest elektroforeza żelowa?

Elektroforeza żelowa jest powszechną techniką stosowaną w laboratoriach do oddzielania naładowanych cząsteczek, takich jak DNA, RNA, białka itp. Od ich mieszanin. Żel stosuje się w elektroforezie żelowej. Działa jak sito molekularne. Istnieją dwa rodzaje żeli stosowanych w elektroforezie żelowej, a mianowicie agaroza i poliakryloamid. Wybór żelu i preparatu żelu są ważnymi czynnikami, które należy wziąć pod uwagę w elektroforezach żelowych, ponieważ wielkość porów żelu należy ostrożnie modyfikować w celu dobrego oddzielenia cząsteczek poprzez elektroforezę żelową. Elektroforeza żelowa ma pole elektryczne połączone z dwoma końcami żelu. Jeden koniec żelu wykazuje ładunek dodatni, podczas gdy drugi koniec jest naładowany ujemnie.

DNA i RNA są cząsteczkami naładowanymi ujemnie. Po załadowaniu do żelu z ujemnego końca żelu i przyłożeniu do pola elektrycznego migrują przez pory żelu w kierunku dodatnio naładowanego końca żelu. Szybkość migracji zależy od ładunku i wielkości cząsteczki. Mniejsze cząsteczki łatwo migrują przez pory żelu niż większe cząsteczki. W związku z tym mniejsze cząsteczki podróżują na dużą odległość przez żel, a większe cząsteczki podróżują na niewielką odległość. Aby zaobserwować podróż cząsteczek na żelu, stosuje się specjalne rodzaje barwników. Pole elektryczne przykłada się na określony czas i zatrzymuje, aby zapobiec utracie cząsteczek i utrzymać cząsteczki w ich przemieszczonych pozycjach. W żelu można zaobserwować różne pasma. Te pasma reprezentują cząsteczki o różnych rozmiarach. Dlatego elektroforeza żelowa jest przydatna do różnicowania cząsteczek według ich wielkości.

Elektroforeza żelowa jest włączona do różnych technik jako technika przygotowawcza w biologii molekularnej, takich jak PCR, RFLP, klonowanie, sekwencjonowanie DNA, Southern blotting, mapowanie genomu itp..

Rycina 01: Elektroforeza w żelu agarozowym

Co to jest strona SDS?

Elektroforeza w żelu poliakryloamidowym z dodecylosiarczanem sodu (SDS Page) jest rodzajem elektroforezy żelowej stosowanej do oddzielania białek. Gdy do rozdzielenia białek stosuje się elektroforezę żelową, potrzebne są specjalne zabiegi, ponieważ białka nie są naładowane ujemnie, jak DNA i RNA, i nie migrują w kierunku końca dodatniego lub ujemnego. Dlatego białka są denaturowane i powlekane ładunkiem ujemnym przed elektroforezą żelową. Odbywa się to za pomocą detergentu zwanego dodecylosiarczanem sodu (SDS). Elektroforeza żelowa z użyciem SDS i żelu poliakryloamidowego jako nośnika jest znana jako SDS Page. Ta technika jest powszechnie stosowana w biochemii, genetyce, medycynie sądowej i biologii molekularnej.

Podczas strony SDS białka są mieszane z SDS. SDS rozkłada białka do kształtu liniowego i powleka je ładunkiem ujemnym proporcjonalnym do ich masy cząsteczkowej. Z powodu ładunku ujemnego cząsteczki białka migrują w kierunku dodatniego końca ładunku żelu i rozdzielają się zgodnie z ich masami cząsteczkowymi. W SDS Page poliakryloamid stosuje się jako stałe podłoże dla żelu. Rzeczywisty rozdział białek zależy głównie od właściwości żelu. Dlatego preparat w żelu poliakryloamidowym powinien być starannie wykonany i należy stosować właściwe stężenia poliakryloamidu. Żele poliakryloamidowe wykazują wysoką rozdzielczość niż żele agarozowe. Dlatego SDS Page jest uważana za technikę rozdzielania białek o wysokiej rozdzielczości.

Strona SDS jest rodzajem denaturującej elektroforezy żelowej. Ma poważne ograniczenie w analizie białek. Ponieważ SDS denaturuje białka przed rozdziałem, nie pozwala na wykrycie aktywności enzymatycznej, interakcji wiążących białka, kofaktorów białka itp..

Rysunek 02: Strona karty charakterystyki

Jaka jest różnica między elektroforezą żelową a stroną SDS?

Elektroforeza żelowa a SDS
Elektroforeza żelowa jest metodą przeprowadzaną w celu oddzielenia makrocząsteczek za pomocą pola elektrycznego.	Strona SDS jest techniką elektroforezy żelowej o wysokiej rozdzielczości stosowaną do oddzielania białek na podstawie ich masy.
Gel Run
Można to wykonać poziomo lub pionowo.	Strona SDS zawsze działa pionowo.
Podstawa separacji
Rozdzielanie odbywa się zgodnie z ładunkiem i rozmiarem.	Separacja białek następuje w zależności od masy i ładunku.
Rozkład
Elektroforeza w żelu agarozowym ma niską rozdzielczość, a elektroforeza w żelu poliakryloamidowym ma wyższą rozdzielczość	Strona SDS ma lepszą rozdzielczość.
Denaturacja
Elektroforeza żelowa obejmuje zarówno techniki denaturujące, jak i niedenaturujące.	Strona SDS denaturuje białka przed rozdziałem.

Podsumowanie - elektroforeza żelowa a SDS

Elektroforeza żelowa jest powszechną techniką stosowaną do rozdzielania i analizy DNA, RNA i białek na podstawie ich wielkości i ładunku. Istnieją dwa główne rodzaje elektroforezy żelowej, a mianowicie elektroforeza w żelu agarozowym i elektroforeza w żelu poliakryloamidowym. Żele agarozowe stosuje się głównie do rozdziału kwasu nukleinowego; gdy wymagana jest wyższa rozdzielczość, stosuje się żele poliakryloamidowe. Strona SDS jest rodzajem elektroforezy żelowej powszechnie stosowanej do rozdzielania złożonych mieszanin białek. Jest uważany za technikę rozdzielania białek o wysokiej rozdzielczości. Jest to różnica między elektroforezą żelową a SDS Page.

Bibliografia:
1. Nowakowski, Andrew B., William J. Wobig i David H. Petering. „Natywna SDS-PAGE: elektroforetyczne rozdzielanie białek w wysokiej rozdzielczości z zachowaniem właściwości natywnych, w tym związanych jonów metali. www.ncbi.nlm.nih.gov. N.p., maj 2014. Web. 7 kwietnia 2017 r
2. Stellwagen, Nancy C. „Elektroforeza DNA w żelach agarozowych, żelach poliakryloamidowych i w wolnym roztworze”. Elektroforeza. U.S. National Library of Medicine, czerwiec 2009. Web. 07 kwietnia 2017 r

Zdjęcie dzięki uprzejmości:
1. „Gelelektrophoreseapparatur” (CC BY-SA 3.0) przez Commons Wikimedia
2. „Elektroforeza w żelu agarozowym DNA” autor School of Natural Resources z Ann Arbor - DNA lab (CC BY 2.0) przez Commons Wikimedia