Różnica między podkładem do przodu i do tyłu

Kluczowa różnica - do przodu kontra podkład wsteczny
 

Reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR) to metoda amplifikacji DNA stosowana w molekularnych zastosowaniach biologicznych. Jest to powszechnie stosowana technika, która sprawia, że ​​miliony do miliardów kopii szczególnie zainteresowanej sekwencji DNA. To jest in vitro metoda wykonywana w laboratoriach. Technika PCR jest całkowicie zależna od komercyjnie produkowanej polimerazy DNA zwanej polimerazą Taq. A także wymaga kilku innych elementów i odpowiedniego utrzymania temperatury. Jednym ważnym składnikiem są podkłady. Startery to krótkie sekwencje DNA zaprojektowane specjalnie dla docelowej sekwencji DNA. Zwykle mają długość około 20 nukleotydów. Polimeraza Taq katalizuje dodawanie nukleotydów do istniejącej sekwencji nukleotydowej. Dlatego startery służą jako punkty wyjścia do syntezy nowych nici. Polimeraza Taq działa tylko w kierunku od 5 'do 3', stąd synteza DNA zachodzi w tym samym kierunku od 5 'do 3'. Ponieważ DNA jest dwuniciowy, w PCR potrzebne są dwa typy starterów. Są one znane jako starter do przodu i starter do tyłu. Startery do przodu i do tyłu są określane na podstawie kierunku wydłużania startera w DNA, gdy zachodzi synteza DNA. Przekaż starter do przodu z nicią antysensownego DNA i inicjuje syntezę nici + ve genu w kierunku od 5 'do 3'. Odwrotny starter hybrydyzuje z nicią sensowną i inicjuje syntezę nici komplementarnej z nicią kodującą; który jest -ve nici genu w kierunku od 5'do 3 '. To jest kluczowa różnica pomiędzy starterem do przodu i do tyłu.

ZAWARTOŚĆ

1. Przegląd i kluczowa różnica
2. Co to jest Primer Forward
3. Co to jest Primer odwrotny
4. Podobieństwa między podkładem do przodu i do tyłu
5. Porównanie obok siebie - Forward vs Reverse Primer w formie tabeli
6. Podsumowanie

Co to jest Forward Primer?

Orientacja do przodu to synteza nici kodującej lub nici sensownej genu. Polimeraza Taq katalizuje syntezę nowej nici w kierunku od 5 'do 3'. Synteza nici kodującej zachodzi, gdy starter hybrydyzuje z nicią niekodującą lub nicią antysensowną i wydłuża się w kierunku od 5 'do 3'.

Rysunek 01: Startery do przodu i do tyłu

Starter, który łączy się z nicią antysensowną lub nicią niekodującą lub nicią matrycową, jest znany jako starter do przodu, ponieważ starter do przodu działa jako punkt wyjścia do syntezy kodowania lub nici dodatniej genu. Starter do przodu ma krótką sekwencję nukleotydową, która jest komplementarna do flankującego końca 3 'nici antysensownej. Hybrydyzuje z nicią antysensowną i ułatwia polimerazie Taq dodawanie nukleotydów, które są komplementarne do nici matrycy.

Co to jest Primer odwrotny?

Starter odwrotny to krótka sekwencja DNA, która łączy się z końcem 3 'nici sensownej lub nici kodującej. Starter wsteczny służy jako punkt wyjścia do syntezy komplementarnej nici sekwencji kodującej lub sekwencji niekodującej. Starter wsteczny jest komplementarny do końca 3 'nici kodującej. W związku z tym przyłącza się do flankującego końca 3 'nici kodującej i umożliwia polimerazie Taq syntezę nici antysensownej lub nici matrycy. Ponieważ jego orientacja jest odwrotna, ten starter jest oznaczony jako starter odwrotny.

Zarówno startery do tyłu, jak i do przodu są ważne dla produkcji od milionów do miliardów kopii poszczególnych regionów DNA, które są celowane lub zainteresowane.

Jakie są podobieństwa między podkładem do przodu i do tyłu?

• Zarówno startery do przodu, jak i do tyłu są wykonane z oligonukleotydów.
• Zarówno startery do przodu, jak i do tyłu posiadają krótką sekwencję nukleotydową komplementarną do flankujących końców podwójnych nici DNA.
• Zarówno startery do przodu, jak i do tyłu zwykle składają się z 20 nukleotydów.
• Zarówno startery do przodu, jak i do tyłu stosuje się w reakcjach łańcuchowych polimerazy.
• Zarówno startery do przodu, jak i do tyłu są syntezowane na rynku.
• Zarówno startery do przodu, jak i do tyłu są stabilne temperaturowo i zwykle mają podobne Tm.
• Zarówno startery do przodu, jak i do tyłu są hybrydyzowane z docelowymi sekwencjami DNA.
• Zarówno startery do przodu, jak i do tyłu zaprojektowano zgodnie z reakcjami PCR.
• Zarówno startery do przodu, jak i do tyłu służą jako punkty wyjścia do amplifikacji DNA.
• Zarówno startery do tyłu, jak i do przodu są ważne przy wytwarzaniu miliona kopii określonych regionów docelowych lub zainteresowanych sekwencji DNA.

Jaka jest różnica między podkładem do przodu i do tyłu?

Forward Primer vs Reverse Primer
Starter do przodu jest krótką sekwencją DNA, która hybrydyzuje z końcem 3 'niekodującej lub nici matrycy genu i służy jako punkt wyjścia do syntezy sekwencji kodującej.	Starter do tyłu jest krótką sekwencją DNA, która hybrydyzuje z końcem 3 'nici kodującej lub nici nieplanowej i służy jako punkt wyjścia do syntezy sekwencji niekodującej.
Wyżarzanie Strand
Przednie wyżarzanie podkładu za pomocą nici szablonu.	Odwrócone wyżarzanie podkładu za pomocą nici niepłytkowej.
Wynikowa nowa sekwencja
Starter do przodu ułatwia syntezę sekwencji kodującej.	Starter wsteczny ułatwia syntezę sekwencji niekodującej.

Podsumowanie - do przodu kontra podkład wsteczny

Istnieją dwa rodzaje starterów związanych z techniką PCR. Są to startery do przodu i do tyłu. W oparciu o wydłużenie startera w syntezie nowej nici DNA, startery te są znakowane lub nazywane. Polimeraza Taq syntetyzuje nowy DNA w orientacji 5 'do 3'. Zatem startery zaprojektowano jako komplementarne do końców 3 'podwójnych nici. Starter do przodu, który wydłuża się w kierunku od 5 'do 3' hybrydyzuje z końcem 3 'antysensownego lub matrycy lub sekwencji niekodującej. Służy jako punkt wyjścia do syntezy sekwencji kodującej. Starter odwrotny, który wydłuża się w kierunku od 5 'do 3' hybrydyzuje z końcem 3 'kodowania lub płytki nieczystej lub nici sensownej. Służy jako punkt wyjścia do syntezy sekwencji niekodującej. Jest to różnica między starterem do przodu i do tyłu.

Odniesienie:

1. „Primer (biologia molekularna).” Wikipedia, Wikimedia Foundation, 20 lutego 2018 r. Dostępne tutaj 
2. „Reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR).” Khan academy. Dostępny tutaj 

Zdjęcie dzięki uprzejmości:

1.'Primers RevComp Melted2'By Richard Wheeler (Zephyris) - Praca własna, (CC BY-SA 3.0) przez Commons Wikimedia